FITC-Dextran (MW 10000)

FITC-Dextran ist eine fluoreszierende Sonde für Fluorescein-Isothiocyanat (FITC) Dextran (Ex=495 nm; Em=525 nm). In Studien zur Zellpermeabilität kann FITC-Dextran die Permeabilität der Blut-Hirn-Schranke und deren Störungen bewerten ^[1,2].

Bei der Analyse des lysosomalen pH-Werts in kultivierten Zellen wird die fluoreszierende Sonde Fluorescein-Isothiocyanat (FITC)-Dextran zusammen mit einer für die Durchflusszytometrie geeigneten dualen Emissionsratiometrie-Technik verwendet. Das fluoreszenzmarkierte Dextran wird endozytiert und im lysosomalen Kompartiment akkumuliert. FITC zeigt eine pH-abhängige Variation der Fluoreszenz bei maximaler Emissionswellenlänge und keine Variation beim Analysieren am Isobestischen Punkt, wodurch das Verhältnis zur Bestimmung des lysosomalen pH-Werts genutzt werden kann^[2]. Fitc-Glucan erhöhte nach 21 Tagen Inkubation die parazelluläre Permeabilität des intestinalen Epithels^[5]. Bei der Untersuchung ihrer Expression und FITC-Dextran-Aufnahme durch verschiedene menschliche DC-Vorbereitungen war die Aufnahme von FITC-Dextran durch LC im Gegensatz zu unreifen Mo-DC nicht effektiv durch Mannose gehemmt, einem Inhibitor für MMR-vermittelte FITC-Dextran-Aufnahme^[7].

Nach 6 Stunden Fasten bei unseren C3H/HeOu-Mäusen erreichten die Plasmakonzentrationen von 4-kDa FITC-Dextran nach oraler Verabreichung nach 45 Minuten ihren Höhepunkt[3]. Die Fluoreszenz kleiner Gefäße und neovaskulärer Knötchen konnte deutlich beobachtet werden, nachdem RO-Injektion von 0,05 ml einer 25 mg/ml oder 50 mg/ml FITC-Dextran-Lösung erfolgt war. Es wurde keine sichtbare Schädigung des Gewebes in der Nähe der Injektionsstelle entdeckt. Der Glaskörperblutfluss nahm bei OIR-Mäusen von P0 bis P5 allmählich ab und verschwand schließlich in P17, wie durch FITC-Dextran-Perfusion gezeigt wurde. Die retinalen NV-Bereiche, die mit Isolectin B4 bewertet wurden, waren größer als diejenigen, die mit FITC-Dextran bewertet wurden, aber die avaskulären Bereiche im Auge waren kleiner[4]. Bei der Messung der Fluoreszenzwiederherstellung nach Photobleichung (FRAP) von fluoresceinisothiocyanat(FITC)-markiertem Dextran mit einem Molekulargewicht von 10 und 250 kDa (FITC-Dextran) in isolierten Rattenkolonie-Krypten war FRAP sowohl für das 10- als auch für das 250-kDa-FITC-Dextran im Kryptallumen innerhalb von zwei bis drei Minuten nahezu vollständig abgeschlossen. In Gegenwart von Amilorid (0,1 mM) oder in Abwesenheit von Na+ wurde die Rate der FITC-Dextran-Aufnahme in das Kryptallumen um 70-80 % reduziert^[6].

References:
[1]: Natarajan R, Northrop N, et,al. Fluorescein Isothiocyanate (FITC)-Dextran Extravasation as a Measure of Blood-Brain Barrier Permeability. Curr Protoc Neurosci. 2017 Apr 10;79:9.58.1-9.58.15. doi: 10.1002/cpns.25. PMID: 28398646; PMCID: PMC5470084.
[2]: Eriksson I, Öllinger K, et,al.Analysis of Lysosomal pH by Flow Cytometry Using FITC-Dextran Loaded Cells. Methods Mol Biol. 2017;1594:179-189. doi: 10.1007/978-1-4939-6934-0_11. PMID: 28456983.
[3]: Woting A, Blaut M. Small Intestinal Permeability and Gut-Transit Time Determined with Low and High Molecular Weight Fluorescein Isothiocyanate-Dextrans in C3H Mice. Nutrients. 2018 May 28;10(6):685. doi: 10.3390/nu10060685. PMID: 29843428; PMCID: PMC6024777.
[4]: Li J, Wu Y, et,al. Retro-orbital injection of FITC-dextran combined with isolectin B4 in assessing the retinal neovascularization defect. BMC Ophthalmol. 2021 May 11;21(1):208. doi: 10.1186/s12886-021-01969-5. PMID: 33975571; PMCID: PMC8112026.
[5]: Sun X, Yang Q, et,al.AMPK improves gut epithelial differentiation and barrier function via regulating Cdx2 expression. Cell Death Differ. 2017 May;24(5):819-831. doi: 10.1038/cdd.2017.14. Epub 2017 Feb 24. PMID: 28234358; PMCID: PMC5423107.
[6]: Thiagarajah JR, Pedley KC, et,al. Evidence of amiloride-sensitive fluid absorption in rat descending colonic crypts from fluorescence recovery of FITC-labelled dextran after photobleaching. J Physiol. 2001 Oct 15;536(Pt 2):541-53. doi: 10.1111/j.1469-7793.2001.0541c.xd. PMID: 11600688; PMCID: PMC2278881.
[7]: Kato M, Neil TK,et,al. Expression of multilectin receptors and comparative FITC-dextran uptake by human dendritic cells. Int Immunol. 2000 Nov;12(11):1511-9. doi: 10.1093/intimm/12.11.1511. PMID: 11058570.