Acridine Orange (Synonyms: NSC 194350) |
| Catalog No.GC41242 |
Acridine Orange est un colorant fluorescent perméable à la cellule et sélectif pour les acides nucléiques. Lorsqu'il se lie aux acides nucléiques, Acridine Orange émet une fluorescence : lors de son intercalation dans DNA double-brin, elle produit une fluorescence verte (excitation 488nm, émission 530nm).
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 494-38-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Acridine Orange est un colorant fluorescent perméable à la cellule et sélectif pour les acides nucléiques. Lorsqu'il se lie aux acides nucléiques, Acridine Orange émet une fluorescence : lors de son intercalation dans DNA double-brin, elle produit une fluorescence verte (excitation 488nm, émission 530nm). Parce que Acridine Orange s'associe à DNA et à RNA dans les mesures différentes, la liaison de Acridine Orange à DNA simple-brin ou à RNA donne une fluorescence allant de l'orange au rouge (excitation 488nm, émission 640nm). Par conséquent, Acridine Orange est communément utilisé pour distinguer les cellules normales, apoptotiques et nécrotiques[1].
References：
[1] Ma T, Zhao Y, Cheng X. Detection of dsRNA by Acridine Orange Staining. Methods Mol Biol. 2024;2771:7-12.
Ce plan fournit seulement un guide, veuillez le modifier pour répondre à vos besoins spécifiques.
1.Préparation de Acridine Orange
(1)Solutions de coloration : Dissoudre la poudre de Acridine Orange dans DMSO à 1mg/mL. Prélever des aliquotes et stocker le stock non-utilisé à -20°C ou à -4°C à l'abri de la lumière (de préférence sous azote); éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
(2)Solution d'emploi : Diluer le stock dans un tampon approprié (milieu sans sérum, HBSS, ou PBS) à 0.5–20μg/mL.
Préparer fraîchement pour chaque expérience et titrer à la concentration optimale.
2.Coloration DNA/RNA des cellules en suspension
(1)Récolter les cellules; placer ~0.2mL de la suspension originale dans les tubes de 2-5mL sur la glace.
(2)Ajouter lentement 0,4mL de tampon de perméabilisation refroidi sur glace; maintenir sur glace pendant ~15s.
(3)Ajouter lentement 1,2mL de la solution d'emploi de Acridine Orange refroidi sur glace; incuber sur glace à l'abri de la lumière pendant 2-15 minutes.
(4)Analyser immédiatement par cytométrie en flux : exciter à 488nm; collecter l'émission verte pour DNA double-brin (dsDNA) à 530nm et l'émission rouge pour RNA/dsDNA à ≥640nm (le complexe AO-acide nucléique présente un pic à 488/650nm).
3.Coloration de cellules adhérentes (sur glace)
(1)Cultiver les cellules sur des lamelles de couverture stériles.
(2)Retirer le milieu, absorber l'excès et conserver les lamelles de couverture dans une chambre humide.
(3)Ajouter 100µL de solution d'emploi de Acridine Orange sur un bord; incliner délicatement pour couvrir toutes les cellules. Incuber sur glace à l'abri de la lumière pendant 2-15 minutes.
(4)Aspirer la coloration, rincer la lamelle de couverture 2-3 fois avec du milieu frais et examiner au microscope à fluorescence.
4.Détection
(1)Microscope à fluorescence ou cytométrie en flux : exciter à 488nm; acquérir la fluorescence verte à 530nm (dsDNA) et la fluorescence orange à 640nm (RNA/ssDNA).
Précautions :
(1)Si les cellules doivent être colorées après fixation, il est recommandé d'utiliser de l'éthanol à 70% pour la fixation, fixer sur glace pendant ≥ 2 h, rincer 1-2 fois avec PBS pré-refroidi après fixation, éliminer tout l'éthanol, puis suivre les étapes ci-dessus pour la coloration;
(2)S'il y a un problème d'extinction des colorants fluorescents, veuillez essayer d'éviter la lumière pour ralentir l'extinction de la fluorescence;
(3)Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables lors de l'opération.
References:
[1] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021 Jan 13;12(1):80.
| Cas No. | 494-38-2 | SDF | |
| Synonymes | NSC 194350 | ||
| Chemical Name | N3,N3,N6,N6-tetramethyl-3,6-acridinediamine | ||
| Canonical SMILES | CN(C)C1=CC(N=C(C=C(N(C)C)C=C2)C2=C3)=C3C=C1 | ||
| Formula | C17H19N3 | M.Wt | 265.4 |
| Solubility | 0.3mg/mL in ethanol, 20mg/mL in DMSO, 2mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.7679 mL | 18.8395 mL | 37.679 mL |
| 5 mM | 753.6 μL | 3.7679 mL | 7.5358 mL |
| 10 mM | 376.8 μL | 1.8839 mL | 3.7679 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >75.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 29 reference(s) in Google Scholar.)
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