Boc-LRR-AMC (Synonyms: Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin) |
| Catalog No.GC42958 |
Boc-LRR-AMC est un substrat fluorescent pour la trypsine, similaire au protéasomme 20S.
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Cas No.: 109358-46-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Boc-LRR-AMC est un substrat fluorescent pour la trypsine, similaire au protéasomme 20S. Boc-LRR-AMC peut être utilisé pour détecter l'activité de type trypsine dans le protéasome 26S ou le noyau du protéasome 20S. La longueur d'onde de détection de Boc-LRR-AMC est de 380nm/460nm[1].
References:
[1]. Gruba N, Wysocka M, Brzezińska M, et al. Bladder cancer detection using a peptide substrate of the 20S proteasome[J]. The FEBS journal, 2016, 283(15): 2929-2948.
CAPA pour l'essai de capture du protéasome (modifié selon vos besoins)[1][2].
1, Rêvement des anticorps: préparer une solution d'anticorps cible à 5μg/ml pour recouvrir une plaque noire 96 puits Maxisorp, puis bloquer la plaque pendant 1 heure avec du PBS contenant 2% de BSA.
2. Capture du protéasome: Les pellets cellulaires ont été lavés dans du PBS et lysés sur glace à une densité cellulaire 107 cells/ml dans un tampon de lyse (50mM TRIS, 0.1% NP40, pH 7.5). Le surnageant a été collecté, analysé à l'aide du réactif d'essai protéique BCA, et la concentration en protéines a été ajustée à 200μg/ml dans le tampon de lyse. 50μl de lysat cellulaire ont ensuite été ajoutés dans chaque 2 heures. La quantité de protéasomes capturés sous ces conditions a été ajustée à environ 200ng par puits à l'aide d'un essai ELISA quantitatif[3].
3. Incubation avec le substrat: Après la capture des protéasomes, les plaques ont été soigneusement lavées avec un tampon de Tris 20mM (contenant 0.1% NP40, pH 7.5), puis lavées avec un tampon de Tris 20mM (pH 7.5) pour éliminer les matériaux excédentaires. Des inhibiteurs du protéasome, dilués dans le tampon deTris 20mM (pH 7.5) ont ensuite été ajoutés dans les puits et incubés avec rotation à température ambiance pendant 10 minutes. Enfin, le substrat fluorescent Boc-LRR-AMC a été dilué dans le tampon de Tris 20mM et ajouté aux puits à une concentration de 100μM.
4. Détection de fluorescence: Les plaques ont été scellées avec un couvercle en plastique et incubées à 37°C pendant environ 30 minutes. Les valeurs de fluorescence ont ensuite été mesurées à l'aide d'un lecteur de microplaques Proteasome-GloMAX ou SpectraMax 190 avec une longeur d'onde d'excitation de 380 nm et une longueur d'onde d'émission de 460 nm.
References:
[1]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay (CAPA) to evaluate subtype-specific proteasome inhibitors[J]. Data in Brief, 2015, 4: 146-151.
[2]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay: a method to measure proteasome activity in vitro[J]. Analytical biochemistry, 2015, 482: 7-15.
[3]. Guillaume B, Chapiro J, Stroobant V, et al. Two abundant proteasome subtypes that uniquely process some antigens presented by HLA class I molecules[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(43): 18599-18604.
| Cas No. | 109358-46-5 | SDF | |
| Synonymes | Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin | ||
| Canonical SMILES | O=C1C=C(C)C2=C(C=C(NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CC(C)C)NC(OC(C)(C)C)=O)=O)=O)=O)C=C2)O1 | ||
| Formula | C33H52N10O7 | M.Wt | 700.8 |
| Solubility | DMF: 14 mg/ml,DMSO: 12 mg/ml,Ethanol: 10 mg/ml,PBS (pH 7.2): 1 mg/ml | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4269 mL | 7.1347 mL | 14.2694 mL |
| 5 mM | 0.2854 mL | 1.4269 mL | 2.8539 mL |
| 10 mM | 0.1427 mL | 0.7135 mL | 1.4269 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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- Purity: >98.00%
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