C12FDG (Synonyms: 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside) |
| Catalog No.GC43021 |
C12FDG est le substrat fluorescent de la β-galactosidase.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 138777-25-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
C12FDG est le substrat fluorescent de la β-galactosidase. Par enzymolyse de la β-galactosidase, la fluorescéine est libérée et sa fluorescence peut être utilisée pour quantifier l'activité de la β-galactosidase. Les maxima d'excitation/émission de la fluorescéine sont de 485/530 nm[1-3].
La coloration à C12FDG (15 μM ; 2 h) permet d'évaluer l'activité de la SA-β-Gal pour détecter la sénescence dans les cellules THP-1 (15 μM ; 2 h) [4]et les cellules A172 (90 min ; 33 µM) [5]. Les mesures sur cellules vivantes de l'activité de la β-galactosidase associée à la sénescence (SA-β-Gal) à l'aide du substrat fluorescent C12FDG, combinées à la détermination du nombre total de cellules à l'aide d'un colorant Hoechst intercalant l'ADN, ouvrent la possibilité de cribler des médicaments sénothérapeutiques [6].
References:
[1]. Zhang YZ, Naleway JJ, et,al. Detecting lacZ gene expression in living cells with new lipophilic, fluorogenic beta-galactosidase substrates. FASEB J. 1991 Dec;5(15):3108-13. doi: 10.1096/fasebj.5.15.1720751. PMID: 1720751.
[2]. Plovins A, Alvarez AM, et,al. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells. Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41. doi: 10.1128/aem.60.12.4638-4641.1994. PMID: 7811104; PMCID: PMC202038.
[3]. Fuhrmann-Stroissnigg H, Santiago FE, et,al. SA-β-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs. J Vis Exp. 2019 Jun 28;(148). doi: 10.3791/58133. PMID: 31305507.
[4]. Díaz M, Pibuel M, et,al. 4-Methylumbelliferone induces antitumor effects independently of hyaluronan synthesis inhibition in human acute leukemia cell lines. Life Sci. 2021 Dec 15;287:120065. doi: 10.1016/j.lfs.2021.120065. Epub 2021 Oct 19. PMID: 34678263.
[5]. Beltzig L, Frumkina A, et,al. Cytotoxic, Genotoxic and Senolytic Potential of Native and Micellar Curcumin. Nutrients. 2021 Jul 13;13(7):2385. doi: 10.3390/nu13072385. PMID: 34371895; PMCID: PMC8308652.
[6].Waltz RA, Whitney KE, et,al. A Systemic and Local Comparison of Senescence in an Acute Anterior Cruciate Ligament Injury-A Pilot Case Series. Life (Basel). 2023 Jul 15;13(7):1567. doi: 10.3390/life13071567. PMID: 37511942; PMCID: PMC10381817.
Protocole d'expérimentation de la β-galactosidase associée au vieillissement par fluorescence (SA-β-Gal) à l'aide de C12FDG [1] :
1. Les cellules ont été cultivées à une densité de 105 cellules/mL.
2. Les cellules ont été lavées une fois avec 200 μL de PBS, puis fixées avec 100 μL de solution de fixation (2% de formaldéhyde /0,2% de glutaraldéhyde eau distillée) à température ambiante pendant 5 minutes.
3. Les cellules ont été lavées avec 200 μL PBS deux fois, colorées avec 100 μL 33 μM C12FDG (PBS,pH=6,0) pendant 10 minutes, puis 200 μL solution de Hoechst (1 μg/mL Hoechst 33342)sur PBS（pH 6,0) pendant 10 minutes.
4. Ces cellules ont été imagées avec un objectif 20× et des filtres d'excitation de 360 nm (Hoechst 33342) et 480 nm (C12FDG), et contrôlées avec des filtres d'émission de 460 nm et 535 nm, respectivement.
Ce protocole n'est qu'un guide et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
Protocole de mesure de l'activité de la β-galactosidase associée à la sénescence à l'aide de C12FDG [2] :
Le substrat fluorogène perméable aux cellules C12FDG a été utilisé pour déterminer l'activité β-galactosidase associée à la sénescence (SA-β-gal) dans les cellules endothéliales traitées par cytométrie en flux.
1. Les cellules endothéliales (CE) ont été alcalinisées (pH 6) avec de la chloroquine (300 μM) pendant 1 heure, suivie d'une incubation de 1 heure avec de C12FDG (33 μM), un substrat fluorogène de la SA-β-gal .
2. Les cellules ont ensuite été lavées avec du PBS glacé, récoltées avec de la trypsine et fraîchement analysées à l'aide du logiciel CellQuest. Les paramètres de diffusion de la lumière ont été réglés pour éliminer les cellules mortes et les débris subcellulaires.
3. Le signal vert de la fluorescéine C12 a été mesuré et l'activité de la SA-β-gal estimée en utilisant l'intensité moyenne de fluorescence (MFI) de la population cellulaire.
| Cas No. | 138777-25-0 | SDF | |
| Synonymes | 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside | ||
| Chemical Name | N-[3',6'-bis(β-D-galactopyranosyloxy)-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-5-yl]-dodecanamide | ||
| Canonical SMILES | O[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H](O)[C@@H]1OC2=CC=C(C3(C4=CC=C(NC(CCCCCCCCCCC)=O)C=C4C(O3)=O)C(C=CC(O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)=C6)=C6O7)C7=C2 | ||
| Formula | C44H55NO16 | M.Wt | 853.9 |
| Solubility | DMSO : 50 mg/mL (58.55 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1711 mL | 5.8555 mL | 11.711 mL |
| 5 mM | 234.2 μL | 1.1711 mL | 2.3422 mL |
| 10 mM | 117.1 μL | 585.5 μL | 1.1711 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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