Coelenterazine 400a |
| Catalog No.GC43290 |
Coelenterazine 400a, un dérivé de coelenterazine naturel, sert d'un substrat de luciférase de Renilla( Rluc), avec la longeur maximale d'onde d'émission de 400nm.
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Cas No.: 70217-82-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Coelenterazine 400a, un dérivé de coelenterazine naturel[1], sert d'un substrat de luciférase de Renilla( Rluc)[2], avec la longeur maximale d'onde d'émission de 400nm.En présence de Rluc, Coelenterazine 400a réagit avec l'oxygène moléculaire, se forme des intermédiaires à haute énergie et émet de la lumière en conséquence[3][4]. Ses interférence minimal aux accepteurs fluorescents le fait devenir un choix idéal pour les essais de transfert d'énergie par résonance de bioluminescence(BRET), c'est communément utilisé pour évaluer les interations de protéine-protéine[3][4].
References:
[1]. Sousa J, Magalhães CM, González-Berdullas P, et al. Comparative Investigation of the Chemiluminescent Properties of a Dibrominated Coelenterazine Analog. Int J Mol Sci. 2022 Jul 30;23(15):8490. doi: 10.3390/ijms23158490. PMID: 35955625; PMCID: PMC9369366.
[2]. Markova SV, Vysotski ES. Coelenterazine-dependent luciferases. Biochemistry (Mosc). 2015 Jun;80(6):714-32. doi: 10.1134/S0006297915060073. PMID: 26531017.
[3]. Min CG, Ferreira PJO, Pinto da Silva L. Theoretically obtained insight into the mechanism and dioxetanone species responsible for the singlet chemiexcitation of Coelenterazine. J Photochem Photobiol B. 2017 Sep;174:18-26. doi: 10.1016/j.jphotobiol.2017.07.012. Epub 2017 Jul 20. PMID: 28750319.
[4]. Vacher M, Fdez Galván I, Ding BW, et al. Chemi- and Bioluminescence of Cyclic Peroxides. Chem Rev. 2018 Aug 8;118(15):6927-6974. doi: 10.1021/acs.chemrev.7b00649. Epub 2018 Mar 1. PMID: 29493234.
[5]. Ming-Liang Yuan, Tian-Yu Jiang, Lu-Pei Du, et al. Luminescence of coelenterazine derivatives with C-8 extended electronic conjugation. Chinese Chemical Letters. 2016, 27(04): 550-554 https://doi.org/10.1016/j.cclet.2016.02.011
[6]. Li J, Wang X, Dong G, et al. Novel furimazine derivatives for nanoluciferase bioluminescence with various C-6 and C-8 substituents. Org Biomol Chem. 2021 Sep 22;19(36):7930-7936. doi: 10.1039/d1ob01098k. PMID: 34549229.
Procotole expérimentale de Coelenterazine 400a dans l'essai BRET
1. Préparation de solution de stock: Dissoudrez Coelenterazine 400a dans l'éthanol à 100% ou le méthanol pour préparer une solution de stock de concentration de 1nM. Prendrez une aliquote de la solution de stock et stocker la solution de stock à -20°C ou -80°C en obscurité.
2. Préparation d'échantillon: Cultivez les cellules dans un milieu appriprié jusqu'à ce qu'elles atteignent la confluence de 70-80%. Utilisez les réactifs de transfections approriés pour le co-transfert des cellules avec la luciférase de Renilla et les plasmides d'accepteur fluorescent. Après la transfection, continuez cultiviter les cellules pendant 24-48 heures pour assurer l'expression adéquate de protéine.
3. Préparation de solution de substrat: Avant l'utilisation, diluez la solution de stock de Coelenterazine 400a avec le milieu de culture cellulaire jusqu'à ce que la concentration de solution atteint 100M.
4.Essai BRET：Lavâtes les cellules transférées et les remettrez dans le phosphate tamponné saline(PBS).Ajoutez la suspension cellulaire de 90µL dans chaque puits de la microplaque blanche à 96 puits. Ajoutez la solution de substrat de 10µL dans chaque puits pour achever la concentration de 10µL finale .
5.Mesure de fluorescence：Après ajout de Coelenterazine 400a, mesurez l’intensité d la luminescence à l’aide du lecteur de microplaque multimode.
Cette protocol fournit seulement une ligne directrice et doit être modifiée selon vos besoins spécifiques.
References:
[1]. Bery N, Rabbitts TH. A Cell-based Screening Method Using an Intracellular Antibody for Discovering Small Molecules Targeting Hard-to-drug Proteins. Bio Protoc. 2022 Feb 20;12(4):e4324. doi: 10.21769/BioProtoc.4324. PMID: 35340285; PMCID: PMC8899552.
| Cas No. | 70217-82-2 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1C(CC2=CC=CC=C2)=NC3=C(CC4=CC=CC=C4)NC(C5=CC=CC=C5)=CN31 | ||
| Formula | C26H21N3O | M.Wt | 391.5 |
| Solubility | 1mg/mL in DMSO, Ethanol: 0.5 mg/mL, Methanol: 0.5 mg/mL | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5543 mL | 12.7714 mL | 25.5428 mL |
| 5 mM | 510.9 μL | 2.5543 mL | 5.1086 mL |
| 10 mM | 255.4 μL | 1.2771 mL | 2.5543 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >97.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 37 reference(s) in Google Scholar.)
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