FITC-Dextran (MW 10000)

FITC-Dextran est une sonde fluorescente pour le dextran de fluorescéine isothiocyanate (FITC) (Ex=495 nm; Em=525 nm). Dans les études de perméabilité cellulaire, FITC-Dextran peut évaluer la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique et sa perturbation ^[1,2].

Lors de l'analyse du pH lysosomal dans des cellules en culture à l'aide de la sonde fluorescente fluorescéine isothiocyanate (FITC)-dextran, une technique ratiométrique à double émission adaptée à la cytométrie en flux est utilisée. Le dextran marqué par fluorescence est endocyté et accumulé dans le compartiment lysosomal. FITC présente une variation dépendante du pH en fluorescence lorsqu'il est analysé à la longueur d'onde d'émission maximale et aucune variation lorsqu'il est analysé au point isosbéstique, permettant ainsi de déterminer le pH lysosomal^[2]. Fitc-glucane a augmenté la perméabilité paracellulaire épithéliale intestinale après 21 jours d'incubation^[5]. Lorsque leur expression et leur absorption de FITC-Dextran ont été examinées par diverses préparations humaines DC, contrairement aux Mo-DC immatures, l'absorption de FITC-dextran par LC n'a pas été efficacement inhibée par la mannose, un inhibiteur pour l'absorption médiée par MMR de FITC-dextran^[7].

Après 6 heures de jeûne chez nos souris C3H/HeOu, les concentrations plasmatiques de FITC-Dextran de 4 kDa ont atteint leur pic à 45 minutes après administration orale[3]. La fluorescence des petits vaisseaux et des touffes néovasculaires pouvait être clairement observée après injection RO de 0,05 ml de FITC-dextran à une concentration de 25 mg/ml ou 50 mg/ml. Aucun dommage visible aux tissus adjacents au site d'injection n'a été découvert. Le flux sanguin vitré a été progressivement réduit du P0 au P5 pour finalement disparaître chez les souris OIR P17, comme démontré par la perfusion au FITC-dextran. Les zones NV rétiniennes évaluées par l'isolectine B4 étaient plus grandes que celles évaluées par le FITC-dextran, mais les zones avasculaires rétiniennes étaient plus petites[4]. Lorsque la récupération fluorescente après photoblanchiment (FRAP) du dextrane marqué au fluorescéine isothiocyanate (FITC) de 10 et 250 kDa (FITC-Dextran) a été mesurée dans des cryptes coliques descendantes isolées chez le rat, FRAP du FITC-Dextran de soit 10 ou soit 250 kDa dans les lumières des cryptes était presque complet en deux à trois minutes. En présence d'amiloride (0,1 mM), ou en absence Na+, le taux d'absorption du FITC-Dextran dans les lumières des cryptes était réduit de 70 à 80 %^[6].

References:
[1]: Natarajan R, Northrop N, et,al. Fluorescein Isothiocyanate (FITC)-Dextran Extravasation as a Measure of Blood-Brain Barrier Permeability. Curr Protoc Neurosci. 2017 Apr 10;79:9.58.1-9.58.15. doi: 10.1002/cpns.25. PMID: 28398646; PMCID: PMC5470084.
[2]: Eriksson I, Öllinger K, et,al.Analysis of Lysosomal pH by Flow Cytometry Using FITC-Dextran Loaded Cells. Methods Mol Biol. 2017;1594:179-189. doi: 10.1007/978-1-4939-6934-0_11. PMID: 28456983.
[3]: Woting A, Blaut M. Small Intestinal Permeability and Gut-Transit Time Determined with Low and High Molecular Weight Fluorescein Isothiocyanate-Dextrans in C3H Mice. Nutrients. 2018 May 28;10(6):685. doi: 10.3390/nu10060685. PMID: 29843428; PMCID: PMC6024777.
[4]: Li J, Wu Y, et,al. Retro-orbital injection of FITC-dextran combined with isolectin B4 in assessing the retinal neovascularization defect. BMC Ophthalmol. 2021 May 11;21(1):208. doi: 10.1186/s12886-021-01969-5. PMID: 33975571; PMCID: PMC8112026.
[5]: Sun X, Yang Q, et,al.AMPK improves gut epithelial differentiation and barrier function via regulating Cdx2 expression. Cell Death Differ. 2017 May;24(5):819-831. doi: 10.1038/cdd.2017.14. Epub 2017 Feb 24. PMID: 28234358; PMCID: PMC5423107.
[6]: Thiagarajah JR, Pedley KC, et,al. Evidence of amiloride-sensitive fluid absorption in rat descending colonic crypts from fluorescence recovery of FITC-labelled dextran after photobleaching. J Physiol. 2001 Oct 15;536(Pt 2):541-53. doi: 10.1111/j.1469-7793.2001.0541c.xd. PMID: 11600688; PMCID: PMC2278881.
[7]: Kato M, Neil TK,et,al. Expression of multilectin receptors and comparative FITC-dextran uptake by human dendritic cells. Int Immunol. 2000 Nov;12(11):1511-9. doi: 10.1093/intimm/12.11.1511. PMID: 11058570.