Puromycin dihydrochloride (Synonyms: CL13900) |
| Catalog No.GC16384 |
Le Puromycin dihydrochloride est produit par Streptomyces alboniger, un actinomycète à Gram positif, à travers une série de réactions enzymatiques.
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Cas No.: 58-58-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Le Puromycin dihydrochloride est produit par Streptomyces alboniger, un actinomycète à Gram positif, à travers une série de réactions enzymatiques.[1] Le Puromycin dihydrochloride comprend un nucléoside lié de manière covalente à un acide aminé, imitant l'extrémité 3' des ARNt aminoacylés qui participent à la livraison des acides aminés aux ribosomes en élongation.[2] Il inhibe la croissance des cellules animales et bloque la synthèse des protéines en se liant aux ribosomes 80S à faible dose.[3]
Une étude in vitro a déterminé la concentration optimale de Puromycin dihydrochloride pour la sélection des cellules transfectées avec EGFPac en effectuant un test de résistance au Puromycin dihydrochloride. Le gène résistant à la puromycine (dénommé pac) codant pour la puromycine N-acétyltransférase a été isolé de Streptomyces aboniger. Si pac est introduit et exprimé dans les cellules animales, les cellules peuvent survivre en présence de Puromycin dihydrochloride. Les résultats ont montré qu'il était possible de produire avec succès un porcelet transgénique cloné somatiquement en utilisant des cellules recombinantes obtenues après transfert de gènes d'un transgène (contenant des unités d'expression EGFP et pac) et une sélection in vitro subséquente avec une faible concentration (2 mg/ml) de puromycine.[3]
Une étude in vivo a été menée pour déterminer si la technique de détection de surface de la traduction (SUnSET) pouvait être utilisée pour mesurer la synthèse des protéines dans des tissus entiers. Actuellement, il y a un intérêt intense pour identifier les mécanismes moléculaires qui régulent la synthèse des protéines musculaires squelettiques. Cette technique permet la visualisation et la quantification de la synthèse des protéines et élimine la nécessité de générer des tissus/animaux radioactifs. Cette étude a également déterminé que la détection de surface de la traduction pouvait détecter des changements relativement aigus dans la synthèse des protéines en l'absence de modifications de l'ARNr ainsi que détecter non seulement des augmentations mais aussi des diminutions de la synthèse des protéines in vivo.[4]
References:
[1]. Tercero JA, Espinosa JC, Lacalle RA, Jiménez A. The biosynthetic pathway of the aminonucleoside antibiotic puromycin, as deduced from the molecular analysis of the pur cluster of Streptomyces alboniger. J Biol Chem 1996;271(3):1579–90.
[2]. Aviner R. et al. The science of puromycin: From studies of ribosome function to applications in biotechnology. Comput Struct Biotechnol J. 2020 Apr 24;18:1074-1083.
[3]. Watanabe S, Iwamoto M, et al. A novel method for the production of transgenic cloned pigs: electroporation-mediated gene transfer to non-cultured cells and subsequent selection with puromycin. Biol Reprod. 2005 Feb;72(2):309-15.
[4]. Goodman CA, Mabrey DM, et al. Novel insights into the regulation of skeletal muscle protein synthesis as revealed by a new nonradioactive in vivo technique. FASEB J. 2011 Mar;25(3):1028-39.
| Expériences cellulaires [1]: | |
Lignées cellulaires | Cellules somatiques fœtales porcines |
Méthode de préparation | Les cellules ont été ensemencées dans des plaques de 24 puits à une densité de 2,5 x 10⁴ cellules par puits et cultivées dans un milieu contenant 0,5 à 6 μg/ml de puromycine dihydrochloride. Une solution stock (10 mg/ml) de puromycine dihydrochloride a été préparée en dissolvant la puromycine dihydrochloride dans de l'eau distillée à la concentration appropriée. Les milieux contenant des quantités variables de puromycine dihydrochloride ont été fraîchement préparés en ajoutant le volume approprié de solution stock de puromycine dihydrochloride. |
Conditions de réaction | 0,5 à 6 μg/ml pendant 7 jours |
Domaines d'application | La puromycine dihydrochloride est un antibiotique qui inhibe la croissance des cellules animales et bloque la synthèse des protéines en se liant aux ribosomes 80S à faibles doses. Pour déterminer la concentration optimale de puromycine dihydrochloride pour la sélection des cellules transfectées avec EGFPac, un test de résistance à la puromycine dihydrochloride a été réalisé avec des cellules somatiques fœtales porcines. Le gène de résistance à la puromycine (appelé pac) codant pour la puromycine N-acétyl transférase a été isolé de Streptomyces aboniger. Si le gène pac est introduit et exprimé dans les cellules animales, celles-ci peuvent survivre en présence de puromycine dihydrochloride. |
| Expériences animales [2]: | |
Modèles animaux | Souris femelles FVB/N, 8–10 semaines. |
Méthode de préparation | La puromycine dihydrochloride a été dissoute dans 100 μl de PBS. Les souris ont été hébergées sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures avec un accès ad libitum à la nourriture et à l'eau, sauf indication contraire. Les souris ont été anesthésiées par injection intrapéritonéale de kétamine (100 mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg) avant toutes les procédures chirurgicales. |
Forme de dosage | La puromycine dihydrochloride a été injectée par voie intrapéritonéale aux souris à une concentration de 0,040 μmol/g. |
Domaines d'application | L'antibiotique puromycine dihydrochloride (un analogue structurel de la tyrosyl-ARNt) et les anticorps anti-puromycine pourraient être utilisés pour détecter la quantité d'incorporation de puromycine dans les chaînes peptidiques naissantes ainsi que pour mesurer les changements dans la synthèse protéique dans les cultures cellulaires. |
Références : [1]. Watanabe S, Iwamoto M, et al. A novel method for the production of transgenic cloned pigs: electroporation-mediated gene transfer to non-cultured cells and subsequent selection with puromycin. Biol Reprod. 2005 Feb;72(2):309-15. [2]. Goodman CA, Mabrey DM, et al. Novel insights into the regulation of skeletal muscle protein synthesis as revealed by a new nonradioactive in vivo technique. FASEB J. 2011 Mar;25(3):1028-39. | |
| Cas No. | 58-58-2 | SDF | |
| Synonymes | CL13900 | ||
| Chemical Name | (S)-2-amino-N-((2S,3R,4S,5R)-5-(6-(dimethylamino)-9H-purin-9-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-yl)-3-(4-methoxyphenyl)propanamide dihydrochloride | ||
| Canonical SMILES | O[C@H]1[C@H]([C@@H](CO)O[C@H]1N2C3=NC=NC(N(C)C)=C3N=C2)NC([C@H](CC(C=C4)=CC=C4OC)N)=O.Cl.Cl | ||
| Formula | C22H29N7O5.2HCl | M.Wt | 544.43 |
| Solubility | ≥ 27.2mg/mL in DMSO, ≥ 99.4mg/mL in Water | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.8368 mL | 9.1839 mL | 18.3678 mL |
| 5 mM | 0.3674 mL | 1.8368 mL | 3.6736 mL |
| 10 mM | 0.1837 mL | 0.9184 mL | 1.8368 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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