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TRIzol LS Reagent

Catalog No.GK20009

Le réactif TRIzol LS est un réactif spécialement utilisé pour extraire de l'ARN de haute qualité à partir d'échantillons liquides (tels que des bactéries, des virus, des levures, des cellules, du sang et une suspension tissulaire).

Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.

TRIzol LS Reagent Chemical Structure

Taille Prix Stock Qté
100mL
140,00 $US
En stock
200mL
250,00 $US
En stock

Tel:(909) 407-4943 Email: sales@glpbio.com

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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Protocol

Self-provided reagents

Chloroform, isopropanol, 70% ethanol (DEPC water configuration), Rnase Free H 2O.

Ⅰ Preparation before experiment

The key to RNA preparation is to inhibit RNA degrading enzymes in cells and prevent contamination of RNA degrading enzymes in the equipment and reagents used. Therefore, the following measures must be taken in the experiment: wear disposable clean gloves; use a special experimental bench for RNA operation; avoid talking during the operation, etc. The above methods can prevent the contamination of the experimenter's sweat and saliva by RNA degrading enzymes.

Cautions:
1. Try to use disposable plastic utensils. If glassware is used, it should be treated with 0.1% DEPC aqueous solution at 37°C for 12 hours before use, and then autoclaved at 120°C for 30 minutes to remove residual DEPC.
2. Reagents used for RNA experiments must be sterilized by dry heat (180°C, 60min) or DEPC water treatment related containers. The sterile water used must be treated with 0.1% DEPC and then autoclaved.
3. Reagents and sterile water for RNA experiments should be dedicated to avoid cross-contamination after mixing.

Ⅱ Experimental operation

Sample size and RNA yield

Sample type Sample size RNA yield
Human whole blood 250 μl 3~10 μg
Leukocyte 1x106 10~20 μg
Cells 1x106 8~15 μg
Tissues such as muscle/brain 25 mg 10~25 μg
Liver 25 mg 50~100 μg

TRIzol LS usage instructions

Liquid samples: Anticoagulated whole blood, Aerum, Virus liquid Suspension cells, Yeast, Bacteria Animal and Plant tissue Adherent cells
1. Sample pretreatment For solid samples such as feces, the samples can be resuspended in PBS, homogenized, centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes, and the supernatant is taken as the virus liquid sample. Other samples can be used directly. If the cell content in the sample is low, the cells need to be precipitated by centrifugation and then resuspended in 250 μl sterile water before proceeding to the following operations. Transfer the sample to a mortar pre-cooled with liquid nitrogen, grind the tissue with a pestle, and continuously add liquid nitrogen in the meantime until it is ground into a powder. Pour out the culture solution from the cultured cells every 10 cm2 and wash them with PBS once to remove as much excess solution as possible.
2. Add TRIzol LS Take 250 μl liquid sample and add it to a 1.5ml EP tube containing 750 μl TRIzol-LS. Add 750μl TRIzol-LS to 250μl liquid sample. Add the ground tissue to a 1.5ml EP tube containing 750 μl TRIzol-LS. Add 750 μl TRIzol-LS to evenly distribute the lysate on the cell surface, then use a pipette to blow the cells off and transfer them to a 1.5ml EP tube.
3. Lysed sample After adding TRIzol-LS, immediately turn the wrist upside down until the cells and tissue powder are evenly dispersed without lumps. Leave it at room temperature for 5 minutes to completely separate the nucleic acid-protein complexes.
4. Add water No additional water is required for liquid samples. Add 250 μl Rnase Free H2O, mix well, and let stand for 2 minutes.
5. Add Chloroform Add 200 μl chloroform, shake vigorously with the wrist for 15 seconds, and leave it at room temperature for 2 minutes.
6. Centrifugal layering Centrifuge at 13,000 rpm for 10 minutes, and transfer 600 μl of colorless supernatant to a new 1.5 ml EP tube.
7. Add isopropanol Add 600 μl of isopropanol to the above 600 μl of supernatant, turn it upside down several times vigorously with the wrist, and place it at -20°C for 5 minutes.
8. Centrifugation of total RNA Centrifuge at 13,000 rpm for 10 minutes, carefully discard the supernatant, and save the bottom total RNA pellet.
9. Rinse total RNA Add 1 ml of 70% ethanol to each tube of the pellet, turn it upside down several times, centrifuge at 13,000 rpm for 5 minutes, carefully discard the supernatant, and save the bottom RNA pellet.
10. Repeat the rinse one more time Repeat step 9 to wash again.
11. Volatile residual ethanol Pour off the washing solution, centrifuge again for a short time for 10 seconds, absorb the remaining washing solution with a 10 μl tip, and place it at room temperature to evaporate the ethanol (~20min).
12. Dissolve total RNA Add 20-100 μl TE Buffer or RNase Free H2O to each tube to dissolve total RNA.

Common problems

1. Low extraction rate. Possible reasons: (a. Sample lysis or homogenization is not complete; b. RNA precipitation is not completely dissolved)
2. A260/A280<1.65. Possible reasons: (a. When measuring the absorbance, the RNA sample was not dissolved in water, but dissolved in TE; b. The amount of tissue added when the sample was homogenized was too much; c. After stratification, the supernatant was less than 500μl; d. The organic phase was mixed when the water phase was absorbed)
3. Excessive DNA contamination. Possible reasons: (a. The amount of reagents added during sample homogenization is too small or the amount of tissue is too much; b. The sample contains organic solvents) Solution: using this reagent usually genomic DNA contamination content <0.1ng/μl, if it is necessary to remove DNA contamination completely, please use Rnase Free DNase I to digest and remove genomic DNA contamination. If you use the Gold Medal cDNA First Strand Reverse Transcription Kit there is no need to digest to remove genomic DNA contamination in advance The kit contains reagents to remove genomic DNA contamination.

Background

Le réactif TRIzol LS est un réactif complet et prêt à l'emploi optimisé pour l'isolement d'ARN total de haute qualité, ou pour l'isolement simultané d'ARN, d'ADN et de protéines à partir d'une variété d'échantillons liquides. Cette solution monophasique de phénol et d'isothiocyanate de guanidine est conçue pour isoler des fractions séparées d'ARN, d'ADN et de protéines à partir d'échantillons liquides provenant de sources humaines, animales, végétales, levuriennes, bactériennes et virales en général en une heure environ.


• Formulé pour une utilisation avec des échantillons liquides tels que le sérum et les préparations virales
• Facilite la récupération de l'ARN, de l'ADN et des protéines à partir d'un seul échantillon liquide
• Offre une excellente capacité de lyse, même avec des fluides biologiques difficiles


Purification fiable de l'ARN à partir de sources d'échantillons multiples
Le réactif TRIzol LS est conçu pour le traitement d'une variété d'échantillons liquides jusqu'à 0,25 ml en volume. Le réactif TRIzol LS diffère du réactif standard TRIzol par sa concentration, ce qui permet le traitement de plus grands échantillons. Tout comme avec le réactif standard TRIzol, l'intégrité des préparations d'ARN résultantes est maintenue grâce à une inhibition hautement efficace de l'activité RNase pendant l'homogénéisation des échantillons. La simplicité de la méthode du réactif TRIzol LS permet un traitement simultané d'un grand nombre d'échantillons. L'ensemble de la procédure peut être effectué en 1 heure. L'ARN total isolé par le réactif TRIzol LS est exempt de contamination protéique et ADN.


Formulé pour servir à plusieurs isolations
Le réactif TRIzol LS vous permet d'effectuer une précipitation séquentielle de l'ARN, de l'ADN et des protéines à partir d'un seul échantillon. Après homogénéisation de l'échantillon avec le réactif TRIzol LS, du chloroforme est ajouté et l'homogénat est autorisé à se séparer en une couche aqueuse supérieure claire (contenant l'ARN), une interface et une couche organique inférieure rouge (contenant l'ADN et les protéines). L'ARN est précipité à partir de la couche aqueuse avec de l'isopropanol. L'ADN est précipité à partir de l'interface aqueux/organique avec de l'éthanol. Les protéines sont précipitées à partir de la couche phénol-éthanol par précipitation d'alcool isopropylique. L'ARN, l'ADN ou les protéines précipités sont lavés pour éliminer les impuretés, puis resuspendus pour être utilisés dans des applications ultérieures.


Les produits purifiés sont idéaux pour une variété d'applications
L'ARN isolé peut être utilisé dans la PCR quantitative en temps réel (qPCR), l'analyse de Northern blot, l'hybridation par dot blot, la sélection poly-(A)+, la traduction In vitro, les tests de protection RNase et le clonage moléculaire. L'ADN isolé peut être utilisé dans la PCR, la digestion enzymatique par restriction et les Southern blots. La protéine isolée peut être utilisée pour les Western blots, la récupération de certaines activités enzymatiques et certaines immunoprécipitations.

Features & Properties

Applications• Formulated for use with liquid samples such as serum and virus preparations
• Facilitates recovery of RNA, DNA, and protein from a single liquid sample
• Offers excellent lysis capability, even with difficult biological fluids
ShippingShip with blue ice.
Storage ConditionsStore at 2-8°C protected from light for 2 years.
UsageFor research use only! Not for use on humans.

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    TRIzol LS Reagent-GlpBio

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