2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye) |
| カタログ番号GK10035 |
2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)（青色の染料付き）は、即時に使える、迅速で簡単なPCR事前混合の溶液であり、青色のローディング緩衝液を含めていて、非常に速いPCR反応に適している。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)（青色の染料付き）は、即時に使える、迅速で簡単なPCR事前混合の溶液であり、青色のローディング緩衝液を含めていて、非常に速いPCR反応に適している。
反応混合物にはプライマー、テンプレート、そして青色のローディング緩衝液が既に含んだddH2O. 2×Taq PCR Master Mixを入れれば済むので、混合ローディング緩衝液の手順を省き、PCR反応後の電気泳動の進展を示すことができる。1%のTAEアガロースゲルにおける青色染料の移動速度は、500bpの二本鎖DNA断片に似ている。
2×Taq PCR Super Fast Mix（青色の染料付き）は非常に速いPCR反応にはよく適していて、伸長速度は5-10 秒/kbに達し、半時間内で最短のPCR完成を可能にさせる。2×Taq PCR Super Fast Mix（青色の染料付き）は、高いGC含有量( >60% )と二次構造のある複雑なテンプレートを効率よく処理し、幅広い遺伝子検出をも支持する。短い断片、またはプラスミドテンプレートなどの簡単なテンプレートを処理する場合は、5秒/kbの伸長速度でサイクルを減らし、PCRの時間をより短くさせる。長い断片( ≥ 3 kb )または低い収量の複雑なテンプレートに対しては、15-20秒/kbの伸長速度またはサイクルの増加が必要になるのかもしれない。
この産物は幅広い遺伝子検査、半定量PCR実験と微量の検出に適している；また、クローニング発見遺伝子のための迅速なPCR増幅、細胞内遺伝子点突然変異(SNP)の分析とその他の目的を容易にする。
アプリケーションのおすすめ：
この産物は非常に強い増殖能力を持ち、時には非特定の増殖が発生する可能性もある。下記の方法で、非特定の増殖バンドを減らせるかもしれない。
(1) アニーリング温度を2-3度あげる；
(2) 混合物の量を減らす、例えば10μlを8μlに；
(3)サイクルの数を2つ減らし、非特定の増殖バンドを減らす。
このプロトコールはあくまでもガイドラインであり、お客様にはご自分のニーズに合わせてご調整願います。
注：テンプレート用量：10-1000 ngのゲノムDNA；1から30ngのプラスミドまたはRT-PCR反応後の1から2μlのcDNA。上記の例は慣例的なPCR反応システムであり、参考までである。テンプレートやプライマーなどの異なる構造に対して、実際の反応条件も様々である。最適の反応条件は、テンプレート、プライマーと標的断片の特徴に応じて設定すべきで、反応システムは、割合に応じて拡張または減少させるべきである。
よくある質問(FAQs)：
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よくある疑問 |
可能な原因 |
解決法 |
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PCR産物が少ない、またはない。 |
不適切なプライマーの設計 |
プライマーの設計には適切なプライマー設計ソフトウェアを選ぶこと。 |
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GC含有量が高い、または断片が長い |
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix（青色の染料付き）（カタログ：GK10036）などの、より適切なDNAポリメラーゼを使用すること。 |
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アニーリング温度が適切ではない；拡張期間が短い；サイクルの数が不足。 |
PCR実験条件を最適化すること。 |
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テンプレートの濃度が低い；実験サンプルが破壊、または劣化。 |
テンプレートの量を適切に増やすこと。 テンプレートを再準備すること。 |
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テンプレートの質がよくない。 |
適切なDNA精製法（カラム精製など）でテンプレートDNAを精製すること。 |
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不適切なプライマー濃度とMg2＋濃度。 |
プライマーとMg2+の濃度を適切に調節する。 |
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定量的なポリメラーゼ連鎖反応(qPCR)における非特定産物の増幅 |
プライマーは非特定の結合と二量体化を示した。
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プライマーの濃度を減らし、必要であればプライマーを再度設計すること。 |
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テンプレートの質がよくない；テンプレートが汚染または劣化 |
ゲル電気泳動でテンプレートの完全性と濃度をチェックし、必要であればテンプレートを再度精製すること。 |
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不適切なサイクリング条件 |
標的のバンドよりも小さい漂遊バンドがある場合は、アニーリング温度を増やし、サイクル数を低くさせることで調整することができる；標的のバンドよりも大きい漂遊バンドがある場合は、伸長時間を短くさせ、サイクルの数を低くさせること。 |
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空白の対象物で増幅産物が現れる |
不適切なプライマーの設計 |
増幅された配列は標的ではない増幅された配列と同じであり、PCR は標的配列ではない配列も増幅することができ、必要であればプライマーを再設計すること。 |
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PCR反応システムが汚染された。 |
増幅産物バンドのサイズが標的バンドと一致しない場合は、汚染が示唆される；混合物、水またはプライマーを新しいものに換えることで実験を繰り返す；エアロゾル汚染を減らす為には、超クリーンベンチで反応システムを準備すること。 |
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バンドがない、または薄い |
プライマーの劣化 |
不適切な貯蔵条件によるプライマーの劣化の有無をチェックし、必要であればプライマーを替えること。 |
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テンプレートの質がよくない |
テンプレートの質はPCR反応の前に確認するべきである。不適切な長期的な貯蔵と繰り返された冷凍と解凍はテンプレートの破壊、ループの開放と劣化を起こす可能性があり、DNAテンプレートを新たに準備するべきである；テンプレートが使用できないのなら、一次増幅の産物は2 回目の増幅のテンプレートとして使う為に、多重に薄めることができる。 |
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酵素の濃度 |
酵素の数の増加を推奨する。 |
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不適切なサイクル条件 |
タッチダウンプログラムを実行する；拡張時間を最適化し、より多くのサイクルを設定する。 |
| Applications |
1.遺伝子検査：この産物の異なるバッチの間のエラーは非常に小さく、幅広い遺伝子検査、半定量PCR実験と微量DNAの検出には特に適している。
2.非常に速いPCR増幅：発現遺伝子のクローニング、細胞内遺伝子の点変異(SNPs)の分析など。 3.PCR産物は3'末端dAオーバーハングを持ち、その後のTAクローニングに使われることができる。 |
| Shipping | Ship with blue ice. |
| Storage Conditions | 長期的な保存の為、-20℃で貯蔵し、24か月間保存できる。頻繁的な使用のためには、4℃で最短六ヶ月間保存するべきである。 |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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