C12FDG (Synonyms: 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside) |
| カタログ番号GC43021 |
C12FDGはβ-ガラクトシダーゼの蛍光基質である。
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Cas No.: 138777-25-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
C12FDGはβ-ガラクトシダーゼの蛍光基質である。β-ガラクトシダーゼの酵素分解により、フルオレセインが放出され、その蛍光を使用して β-ガラクトシダーゼの活性を定量化できる。フルオレセインの励起/発光の最大値は485/530 nmである。
C12FDG(15μM；2時間)染色は、THP-1細胞(15μM；2時間)およびA172細胞(90分；33μM)における SA-β-Gal 活性を評価して老化を検出できる。蛍光基質C12FDGを用いた老化関連β-ガラクトシダーゼ（SA-β-Gal）活性の生細胞測定と、DNAのインターカレートヘキスト色素を用いた総細胞数の測定を組み合わせることで、老化治療薬のスクリーニングが可能になる。
References:
[1]. Zhang YZ, Naleway JJ, et,al. Detecting lacZ gene expression in living cells with new lipophilic, fluorogenic beta-galactosidase substrates. FASEB J. 1991 Dec;5(15):3108-13. doi: 10.1096/fasebj.5.15.1720751. PMID: 1720751.
[2]. Plovins A, Alvarez AM, et,al. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells. Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41. doi: 10.1128/aem.60.12.4638-4641.1994. PMID: 7811104; PMCID: PMC202038.
[3]. Fuhrmann-Stroissnigg H, Santiago FE, et,al. SA-β-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs. J Vis Exp. 2019 Jun 28;(148). doi: 10.3791/58133. PMID: 31305507.
[4]. Díaz M, Pibuel M, et,al. 4-Methylumbelliferone induces antitumor effects independently of hyaluronan synthesis inhibition in human acute leukemia cell lines. Life Sci. 2021 Dec 15;287:120065. doi: 10.1016/j.lfs.2021.120065. Epub 2021 Oct 19. PMID: 34678263.
[5]. Beltzig L, Frumkina A, et,al. Cytotoxic, Genotoxic and Senolytic Potential of Native and Micellar Curcumin. Nutrients. 2021 Jul 13;13(7):2385. doi: 10.3390/nu13072385. PMID: 34371895; PMCID: PMC8308652.
[6].Waltz RA, Whitney KE, et,al. A Systemic and Local Comparison of Senescence in an Acute Anterior Cruciate Ligament Injury-A Pilot Case Series. Life (Basel). 2023 Jul 15;13(7):1567. doi: 10.3390/life13071567. PMID: 37511942; PMCID: PMC10381817.
| C12FDG を使用した蛍光老化関連 β-ガラクトシダーゼ (SA-β-Gal) 実験のプロトコル [1]: | |
プロトコル | 1. 細胞を105 細胞 /mLの密度で培養した。 2. 細胞を200 μL PBSで1回洗浄し、次に100 μL固定液 (2% ホルムアルデヒド /0.2% グルタルアルデヒド蒸留水) で室温で 5 分間固定した。 3. 細胞を 200 μL PBS で 2 回洗浄し、100 μL 33 μM C12FDG (PBS、pH=6.0) で 10 分間染色し、次に PBS (pH 6.0) 上の 200 μL Hoechst 溶液(1 μg/mL Hoechst 33342) で10分間染色した。 4. これらの細胞は、20 倍の対物レンズと 360 nm (Hoechst 33342) および 480 nm (C12FDG) の励起フィルターを使用して画像化され、それぞれ460 nmおよび535 nmの発光フィルターを使用して監視された。 このプロトコルはガイドラインのみを提供するものであり、特定のニーズに応じて変更する必要がある。 |
C12FDG を使用した老化関連 β-ガラクトシダーゼ活性の測定プロトコル [2]: | |
プロトコル | 蛍光性細胞透過性基質C12FDGを使用して、フローサイトメトリーにより処理された内皮細胞における老化関連β-ガラクトシダーゼ活性 (SA-β-gal) を測定した。 1. 内皮細胞 (EC) をクロロキン (300 μM) で 1 時間アルカリ化 (pH 6) し、続いて SA-β-gal の蛍光性基質である C12FDG (33 μM) で 1 時間インキュベートした。 2. その後、細胞を氷冷 PBS で洗浄し、トリプシンで回収し、CellQuest ソフトウェアを使用して新たに分析した。光散乱パラメータは、死細胞と細胞内破片を除去するように設定された。 3. 緑色の C12-フルオレセイン信号を測定し、細胞集団の平均蛍光強度 (MFI) を使用して SA-β-gal 活性を推定した。 |
参考文献: [1]. Udono M, Kadooka K, et,al. Quantitative analysis of cellular senescence phenotypes using an imaging cytometer. Methods. 2012 Mar;56(3):383-8. doi: 10.1016/j.ymeth.2012.02.012. Epub 2012 Mar 3. PMID: 22406489. [2]. Qureshi AW, Altamimy R, et,al. Ageing enhances the shedding of splenocyte microvesicles with endothelial pro-senescent effect that is prevented by a short-term intake of omega-3 PUFA EPA:DHA 6:1. Biochem Pharmacol. 2020 Mar;173:113734. doi: 10.1016/j.bcp.2019.113734. Epub 2019 Dec 5. PMID: 31811867. | |
| Cas No. | 138777-25-0 | SDF | |
| 同義語 | 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside | ||
| Chemical Name | N-[3',6'-bis(β-D-galactopyranosyloxy)-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-5-yl]-dodecanamide | ||
| Canonical SMILES | O[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H](O)[C@@H]1OC2=CC=C(C3(C4=CC=C(NC(CCCCCCCCCCC)=O)C=C4C(O3)=O)C(C=CC(O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)=C6)=C6O7)C7=C2 | ||
| Formula | C44H55NO16 | M.Wt | 853.9 |
| 溶解度 | DMSO : 50 mg/mL (58.55 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1711 mL | 5.8555 mL | 11.711 mL |
| 5 mM | 234.2 μL | 1.1711 mL | 2.3422 mL |
| 10 mM | 117.1 μL | 585.5 μL | 1.1711 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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