FLAG tag Peptide (Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH) |
| カタログ番号GP10150 |
FLAG tag Peptideは、腸管キナーゼ制限部位を含む8ペプチド（Asp-Tyr-lys-Asp-Asp-ASP-ASP-ASP-Lys）である。
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Cas No.: 98849-88-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
FLAG tag Peptideは、腸管キナーゼ制限部位を含む8ペプチド（Asp-Tyr-lys-Asp-Asp-ASP-ASP-ASP-Lys）である。FLAG tag Peptide融合システムは、タンパク質の同定および精製のためのイムノアフィニティークロマトグラフィーに使用される。FLAG tag Peptide標識ペプチドは、非変性条件下での溶出を可能にする。FLAG tag Peptideは、所定の融合タンパク質のN末端またはC末端のいずれかに融合させることができる。
FLAG tag Peptideマーカーペプチド融合システムは、タンパク質の同定と精製にユニークで広く有用な技術を構成する。抗Flag M1抗体を固体支持体に共有結合させると、カルシウム依存性の穏やかなアフィニティークロマトグラフィーでFLAG tag Peptide融合タンパク質を迅速に精製することができる。FLAG tag Peptide融合タンパク質は、通常、pH7.2の生理食塩水（カルシウムまたはEDTAを含む）以外の条件下でタンパク質に暴露することなく、粗細胞ホモジネートまたは上清から開始し、一段階で均質に精製される。精製プロセス全体は、数時間以内に行うことができる。
N末端FLAG tag Peptide融合タンパク質は、アガロースアフィニティーゲルによって精製することができる。短縮化されたタンパク質精製手順では、機械的な細胞破砕と、抗FLAG M1抗体を固定化した磁性ガラスビーズによるアフィニティー精製を組み合わせている。改良ガラスビーズを酵母細胞に加え、実験室のボルテックスミキサーで混合した。磁性ガラスビーズは標的タンパク質を捕捉し、酵母細胞は破壊される。固定磁石と接触させることで、磁性ガラスビーズは酵母細胞の残骸から非常に効率的に分離できる。EDTAなどのキレート剤は、磁性ガラスビーズからFLAG tag Peptide融合タンパク質を溶出することができた。
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
| FLAGペプチドとアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を結合させたプルダウン法により、特定の細胞rnaからなるリボヌクレオタンパク質(RNP)複合体を精製する[1]： | |
準備方法 | FLAGペプチド結合アンチセンスオリゴヌクレオチドの調製 1.20μM（1,000pmol/50μL）の氷冷オリゴヌクレオチド50μLを、50μLの冷1M NaIO4と混合する。 2.氷上で10分間インキュベートする。 3.氷冷した2 % LiClO4/アセトン1 mLを加え、ボルテックスする。 4.氷上で10分間インキュベートする。 5.チューブを20,000?g、4℃で10分間遠心する。 6.上清を注意深く廃液まで吸引し、1mLの冷アセトンを加える。 7.チューブを4℃で20,000?g、5分間遠心する。 8.遠心中にFLAG-ヒドラジド溶液を調製する。 9.上清を廃棄する。 10.沈殿したオリゴヌクレオチドを12μLの0.1M酢酸ナトリウム（pH5.2）に溶解する。 11.12 μLの30 mM FLAG-ペプチド-ヒドラジド溶液を加える。 12.チューブを室温で30分間インキュベートする。 13.1MのNaCNBH3を10μL加える。 14.チューブを室温で30分間インキュベートする。 15.超純水60μLと3M酢酸ナトリウム（pH5.2）10μLを加え、ボルテックスする。 16.250μLの100%エタノールを加え、ボルテックスする。 17.80℃で30分間インキュベートする。 18.15,000?gで10分間遠心する。 19.上清を注意深く吸引して廃棄し、1mLの80%エタノールを加える。 20.チューブを15,000?gで5分間遠心する。 21.上清を注意深く吸引し、廃棄する。洗浄ステップを繰り返す。 22.オリゴヌクレオチドのペレットを50μLの水に溶かす。 23.260nmの吸光度を測定し、元のオリゴヌクレオチド溶液の吸光度と比較することにより、FLAG-ペプチド結合オリゴヌクレオチドの濃度を推定する。 |
反応条件 | |
アプリケーション | |
参考文献: [1]. Adachi S, Natsume T. Purification of noncoding RNA and bound proteins using FLAG peptide-conjugated antisense-oligonucleotides. Methods Mol Biol. 2015;1262:265-74. doi: 10.1007/978-1-4939-2253-6_16. PMID: 25555587. | |
| Cas No. | 98849-88-8 | SDF | |
| 同義語 | H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH | ||
| Chemical Name | FLAG Peptide | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=CC=C1CC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)N)O | ||
| Formula | C41H60N10O20 | M.Wt | 1012.97 |
| 溶解度 | ≥50.6 mg/mL in DMSO, ≥210.6 mg/mL in Water, ≥34.03 mg/mL in EtOH | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 987.2 μL | 4.936 mL | 9.872 mL |
| 5 mM | 197.4 μL | 987.2 μL | 1.9744 mL |
| 10 mM | 98.7 μL | 493.6 μL | 987.2 μL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
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- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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