N-Ethylmaleimide (Synonyms: NEM) |
| カタログ番号GC34682 |
N-Ethylmaleimide (NEM)は、マレイン酸から派生し、遊離のスルフヒドリル基をアルキル化することができる。NEMは、タンパク質やペプチドのシステイン残基を修飾するために使用されるタンパク質スルフヒドリル修飾剤である。NEMは、プロリルエンドペプチダーゼをIC50値6.3 μMで阻害する。
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Cas No.: 128-53-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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N-Ethylmaleimide (NEM)は、マレイン酸から派生し、遊離のスルフヒドリル基をアルキル化することができる。NEMは、タンパク質やペプチドのシステイン残基を修飾するために使用されるタンパク質スルフヒドリル修飾剤である。NEMは、プロリルエンドペプチダーゼをIC50値6.3 μMで阻害する。NEMは、すべてのシステインペプチダーゼの不可逆的阻害剤であり、アルキル化は活性部位のチオール基で起こる。NEMは、脱ユビキチン化酵素の阻害剤としても使用されている。
In vitroでは、NEM（20 μM）を血管平滑筋細胞に処理すると、血小板由来成長因子BB（PDGF-BB）によって刺激されたAkt Ser-473、Akt Thr-308、p70S6K、リボソームタンパク質S6、4E-BP1、BAD、およびFKHR-L1のリン酸化を効果的に抑制した。
In vivoでは、NEM（10 mg/kg、皮下投与）を無水エタノール注射によって急性胃潰瘍を誘発された雄ウィスターラットに処理すると、急性胃潰瘍の病変面積が増加し、モモルディカ・チャランティアIcの胃保護効果が弱まった。
References:
[1] Robotham A C, Kelly J F. Detection and quantification of free sulfhydryls in monoclonal antibodies using maleimide labeling and mass spectrometry[C]//MAbs. Taylor & Francis, 2019, 11(4): 757-766.
[2]Moriyama A, Nakanishi M, Sasaki M. Porcine muscle prolyl endopeptidase and its endogenous substrates[J]. The Journal of Biochemistry, 1988, 104(1): 112-117.
[3]Schirmeister T. New peptidic cysteine protease inhibitors derived from the electrophilic α-amino acid aziridine-2, 3-dicarboxylic acid[J]. Journal of medicinal chemistry, 1999, 42(4): 560-572.
[4]Sarkar K, Sadhukhan S, Han S S, et al. SUMOylation-disrupting WAS mutation converts WASp from a transcriptional activator to a repressor of NF-κB response genes in T cells[J]. Blood, The Journal of the American Society of Hematology, 2015, 126(14): 1670-1682.
[5]Yellaturu C R, Bhanoori M, Neeli I, et al. N-Ethylmaleimide inhibits platelet-derived growth factor BB-stimulated Akt phosphorylation via activation of protein phosphatase 2A[J]. Journal of Biological Chemistry, 2002, 277(42): 40148-40155.
[6]Matsuda H, Li Y, Yoshikawa M. Roles of capsaicin-sensitive sensory nerves, endogenous nitric oxide, sulfhydryls, and prostaglandins in gastroprotection by momordin Ic, an oleanolic acid oligoglycoside, on ethanol-induced gastric mucosal lesions in rats[J]. Life Sciences, 1999, 65(2): 27-32.
このプランはあくまでガイドラインであり、具体的なニーズに合わせて修正してください。
1. 溶液の準備
(1)ストック溶液: N-EthylmaleimideをDMSOに溶解して最終濃度25 mg/mLにする。
注意: 未使用のストック溶液は分注し、-20℃の暗所に保管し、凍結融解を繰り返さないようにする。
(2)作業溶液: ストック溶液をアッセイバッファーで希釈し、最終濃度3 mg/mLにする。
注意: 実際の状況に応じて最適な作業濃度を調整するか、文献を参考にして濃度のグラデーションを設定してください。作業溶液は調製後すぐに使用してください。
2. N-Ethylmaleimideを使用したタンパク質標識の実験手順[1]（文献より、参考までに）
(1)バッファー交換: 10 kDaのカットオフ遠心フィルターを使用して、タンパク質バッファーを6 M塩酸グアニジン、100 mM酢酸ナトリウム（pH 5.5）に交換し、最終タンパク質濃度を0.5 mg/mLにする。
(2)溶液の準備: DMSOで25 mg/mLのN-ethylmaleimideストック溶液を調製し、使用前に100 mM酢酸ナトリウム（pH 5.5）で3 mg/mLに希釈する。
(3)タンパク質の標識: 150倍モル過剰のN-ethylmaleimideで室温で30分間タンパク質を標識する。
(4)過剰N-ethylmaleimideの除去: 同じ遠心フィルターを使用して、タンパク質バッファーを6 M塩酸グアニジン、100 mM酢酸ナトリウム（pH 5.5）に交換し、最終タンパク質濃度を1.0 mg/mLにする。
(5)タンパク質の還元: 5 mM TCEPを37℃で15分間処理して、すべてのジスルフィド結合を除去する。
(6)タンパク質溶液の希釈: 100 mM Tris-HCl（pH 7.0）でタンパク質溶液を6倍に希釈し、塩酸グアニジン濃度を約1 Mに減少させ、pHを約7.0に上げる。
注意: このプロトコルは、N-Ethylmaleimideを使用したタンパク質標識実験のガイダンスを提供する。他の文献や特定の実験要件に応じて調整できる。反応に干渉しないように、操作は無菌環境で行う必要がありる。反応試薬に直接触れないように注意してください。
参考文献：
[1]Robotham A C, Kelly J F. Detection and quantification of free sulfhydryls in monoclonal antibodies using maleimide labeling and mass spectrometry[C]//MAbs. Taylor & Francis, 2019, 11(4): 757-766.
| Cas No. | 128-53-0 | SDF | |
| 同義語 | NEM | ||
| Canonical SMILES | O=C(C=C1)N(CC)C1=O | ||
| Formula | C6H7NO2 | M.Wt | 125.13 |
| 溶解度 | DMSO : 50 mg/mL (399.58 mM) Water : 50 mg/mL (399.58 mM), Ethanol : 12.5 mg/mL (99.90 mM) | Storage | Store at 4°C, sealed storage, away from moisture and light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 7.9917 mL | 39.9584 mL | 79.9169 mL |
| 5 mM | 1.5983 mL | 7.9917 mL | 15.9834 mL |
| 10 mM | 0.7992 mL | 3.9958 mL | 7.9917 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
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- SDS (Safety Data Sheet)
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