2×Taq PCR Fusion-Fast Mix(with blue dye) |
| カタログ番号GK10036 |
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix（青色の染料付き）は、非常に快速で、高い忠実度のPCR事前混合溶液で、青色のローディング緩衝液を含めている。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Fusion-Fast Mix（青色の染料付き）は、非常に快速で、高い忠実度のPCR事前混合溶液で、青色のローディング緩衝液を含めている。この事前混合された配合は、PCRを成り立たせるためのピペッティング手順の数が減った為、時間を節約し、汚染を減らす。
反応混合物にはプライマー、テンプレート、そして青色のローディング緩衝液が既に含んだddH2O. 2×Taq PCR Fusion-Fast Mix（青色の染料付き）を入れれば済むので、混合ローディング緩衝液の手順を省き、PCR反応後の電気泳動の進展を示すことができる。1%のTAEアガロースゲルにおける青色染料の移動速度は、500bpの二本鎖DNA断片に似ている。
Fusion-Fast DNAポリメラーゼは3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を持たず、3'-dAオーバーハングを持つPCR産物を生成し、精製後、TAベクトルクローニングに直接使われることができる。Fusion-Fast DNAポリメラーゼは高いGC含有量( >60% )と二次構造のある複雑なテンプレートを効率よく処理し、幅広い遺伝子検出をも支持する。Fusion-Fast DNAポリメラーゼのエラー率は、Taq DNAポリメラーゼより50倍低く、Super Fast Taqポリメラーゼより6倍低い。高い忠実度、低いミスマッチ率、速い増幅速度(5-10秒/kb)、長い断片(>3kb)を増幅させる能力、強い特定力と広い適応能力がその特徴である。
2×Taq PCR Fusion-Fast Mix（青色の染料付き）は、幅広い遺伝子検出、半定量的なPCR実験、そしてPCR増幅後の微量の検出に使われることができる。また、クローニング発見遺伝子、遺伝子点突然変異(SNP)の分析、そして遺伝子標的変異を含めたゲノムなどの複雑なテンプレートからのPCR産物の増幅にも使われることができる。
このプロトコールはあくまでもガイドラインであり、お客様にはご自分のニーズに合わせてご調整願います。
注：
1.テンプレート用量：10-1000 ngのゲノムDNA；1から30ngのプラスミドまたはRT-PCR反応後の1から2μlのcDNA。上記の例は慣例的なPCR反応システムであり、参考までである。テンプレートやプライマーなどの異なる構造に対して、実際の反応条件も様々である。最適の反応条件は、テンプレート、プライマーと標的断片の特徴に応じて設定すべきで、反応システムは、割合に応じて拡張または減少させるべきである。
2.増幅速度：高いGCまたは高いATテンプレートと原油抽出テンプレート対して、伸長速度を適切に減らすことはPCRの成功率を高めることができる。上記の三つのケースにおいて、10-15秒/kbを推奨する。
よくある質問(FAQs)：
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よくある疑問 |
可能な原因 |
解決法 |
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PCR産物が少ない、またはない。 |
不適切なプライマーの設計 |
プライマーの設計には適切なプライマー設計ソフトウェアを選ぶこと。 |
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アニーリング温度が適切ではない；拡張期間が短い；サイクルの数が不足。 |
PCR実験条件を最適化すること。 |
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テンプレートの濃度が低い；実験サンプルが破壊、または劣化。 |
テンプレートの量を適切に増やすこと。 テンプレートを再準備すること。 |
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テンプレートの質がよくない。 |
適切なDNA精製法（カラム精製など）でテンプレートDNAを精製すること。 |
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不適切なプライマー濃度とMg2＋濃度。 |
プライマーとMg2+の濃度を適切に調節する。 |
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定量的なポリメラーゼ連鎖反応(qPCR)における非特定産物の増幅 |
プライマーは非特定の結合と二量体化を示した。 |
プライマーの濃度を減らし、必要であればプライマーを再度設計すること。 |
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テンプレートの質がよくない；テンプレートが汚染または劣化 |
ゲル電気泳動でテンプレートの完全性と濃度をチェックし、必要であればテンプレートを再度精製すること。 |
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不適切なサイクリング条件 |
標的のバンドよりも小さい漂遊バンドがある場合は、アニーリング温度を増やし、サイクル数を低くさせることで調整することができる；標的のバンドよりも大きい漂遊バンドがある場合は、伸長時間を短くさせ、サイクルの数を低くさせること。 |
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空白の対象物で増幅産物が現れる |
不適切なプライマーの設計 |
増幅された配列は標的ではない増幅された配列と同じであり、PCR は標的配列ではない配列も増幅することができ、必要であればプライマーを再設計すること。 |
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PCR反応システムが汚染された。 |
増幅産物バンドのサイズが標的バンドと一致しない場合は、汚染が示唆される；混合物、水またはプライマーを新しいものに換えることで実験を繰り返す；エアロゾル汚染を減らす為には、超クリーンベンチで反応システムを準備すること。 |
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バンドがない、または薄い |
プライマーの劣化 |
不適切な貯蔵条件によるプライマーの劣化の有無をチェックし、必要であればプライマーを替えること。 |
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テンプレートの質がよくない |
テンプレートの質はPCR反応の前に確認するべきである。不適切な長期的な貯蔵と繰り返された冷凍と解凍はテンプレートの破壊、ループの開放と劣化を起こす可能性があり、DNAテンプレートを新たに準備するべきである；テンプレートが使用できないのなら、一次増幅の産物は2 回目の増幅のテンプレートとして使う為に、多重に薄めることができる。 |
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酵素の濃度 |
酵素の数の増加を推奨する。 |
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不適切なサイクル条件 |
タッチダウンプログラムを実行する；拡張時間を最適化し、より多くのサイクルを設定する。 |
| Applications |
1.遺伝子検査：この産物の異なるバッチの間のエラーは非常に小さく、幅広い遺伝子検査、半定量PCR実験と微量DNAの検出に適している。
2.ゲノムなどの複雑なテンプレートからのPCR産物を増幅する為に使用され、また、発現遺伝子のクローニング、遺伝子の部位特異的変異誘発、細胞内遺伝子の点変異(SNPs)の分析などに使われる。 |
| Shipping | Ship with blue ice. |
| Storage Conditions | 長期的な保存の為、-20℃で貯蔵し、24か月間保存できる。頻繁的な使用のためには、4℃で最短六ヶ月間保存するべきである。 |
| Usage | For research use only! Not for use on humans. |
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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