3X HA Tag |
| Catalog No.GC72280 |
3X HA Tag는 9-아미노산 서열 YPYDVPDYA가 3번 반복된 생물 활성 펩타이드이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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3X HA Tag는 9-아미노산 서열 YPYDVPDYA가 3번 반복된 생물 활성 펩타이드이다. HA 태그는 인간 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 표면 당단백질에서 유래되었고 높은 특이성과 친수성을 특징으로 한다. 융합 단백질 표면에서 항원-항체 반응의 가능성을 높인다[2]. 반복 횟수가 많을수록 3X HA Tag는 더 강력한 항원성과 항-HA 항체에 대한 높은 결합 친화력을 가지고 있어 특히 저농도 단백질의 경우 더 높은 검출 민감도를 보장한다[3]. 게다가 HA 태그 단백질을 엘류트하기 위해 단백질 친화 정제 실험에서 일반적으로 사용되고 있다[4][5].
References:
[1] Schneider, B. L., Seufert, W., Steiner, B., Yang, Q. H., & Futcher, A. B. (1995). Use of polymerase chain reaction epitope tagging for protein tagging in Saccharomyces cerevisiae. Yeast (Chichester, England), 11(13), 1265–1274.
[2] Zhao, X., Li, G., & Liang, S. (2013). Several affinity tags commonly used in chromatographic purification. Journal of analytical methods in chemistry, 2013, 581093.
[3] Ensinck, M., De Keersmaecker, L., Heylen, L., Ramalho, A. S., Gijsbers, R., Farré, R., De Boeck, K., Christ, F., Debyser, Z., & Carlon, M. S. (2020). Phenotyping of Rare CFTR Mutations Reveals Distinct Trafficking and Functional Defects. Cells, 9(3), 754.
[4] Lim, J., Iftner, T., & Simon, C. (2021). Native Isolation of 3×HA-Tagged Protein Complexes to Characterize Protein-Protein Interactions. Current protocols, 1(2), e29.
[5] Tanaka, T., Umemori, T., Endo, S., Muramatsu, S., Kanemaki, M., Kamimura, Y., Obuse, C., & Araki, H. (2011). Sld7, an Sld3-associated protein required for efficient chromosomal DNA replication in budding yeast. The EMBO journal, 30(10), 2019–2030.
3X HA Tag를 사용한 단백질 정제 프로토콜[1]：
A：세포 적출 및 용해
1.Sld7–3Flag–HA를 발현하는 YTT4 세포(7×10⁷ 세포/ml, 2.5L)를 수확합니다.
2.세포를 증류수로 한 번 세척합니다.
3.액체 질소하에서 모르타르 분쇄기를 사용해서 세포를 파괴합니다.
4.세포 가열액을 5ml의 가열 버퍼 A(50mM HEPES–KOH(pH 7.5), 300mM KCl, 0.5% Tween 20, 0.05% NP40, 10% 글리세롤, 1×Complete, 1% 프로테아제 억제제 혼합물, 50mM NaF, 2mM b-glycerophosphate, 0.4 mM Na3VO4, 0.5 mM Na4P2O7, 1mM PMSF)에 소생시킵니다.
5.가열액을 4°C에서 12,000rpm으로 15분간 원심 분리해서 정화합니다.
B: 단백질 추출 및 흡착
6. 단백질 추출물을 1ml의 Sepharose 4B에 4°C에서 30분 동안 흡착시킵니다. 7. 5mg/ml BSA가 포함된 가열 버퍼 A로 사전 처리된 1ml의 anti-Flag M2 친화성 겔과 함께 혼합물을 4°C에서 2.5시간 동안 배양합니다.
C: 플래그 펩타이드로 세척 및 용출
8. 5mg/ml BSA가 포함된 용해 버퍼 A ml로 비드를 세 번 세척합니다. 9. 4°C에서 500μl의 플래그 엘류션 버퍼(3×Flag펩타이드 150mg/ml이 포함된 가열 버퍼 A)와 함께 구슬을 1시간 동안 배양해서 결합된 단백질을 두 번 엘류션합니다.
D: 항-HA 매트릭스를 사용한 추가 정화
10. 120μl의 항-HA 매트릭스(항-Flag M2 친화 겔로 사전 처리됨)와 엘류션된 용액을 혼합해서 4°C에서 2.5시간 동안 배양합니다.
11. 5mg/ml BSA가 포함된 버퍼 A로 구슬을 세 번 세척하고 0.1mg/ml BSA가 포함된 버퍼 A로 한 번 세척한 후 버퍼 A로 한 번 더 세척합니다.
12. 37°C에서 1.5mg/ml 3×HA펩타이드가 포함된 HA 엘류션 버퍼(가열 버퍼 A)와 함께 구슬을 두 번 각각 30분 동안 배양해서 결합된 단백질을 엘류션합니다.
E: 단백질 침전 및 분석
13. 삼염화탄산을 추가하고 후속 원심 분리해서 단백질을 침전시킵니다.
14. 침전물을 50μl의 1×SDS 로딩 버퍼에서 3분 동안 끓입니다.
15. SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 단백질을 분리하고 SilverQuest로 착색합니다.
16. 겔에서 단백질 밴드를 절제하고 트립신으로 소화한 후 질량분석기로 분석합니다.
이 프로토콜은 단지 가이드라인을 제공하고 특정 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
References:
[1] Tanaka, T., Umemori, T., Endo, S., Muramatsu, S., Kanemaki, M., Kamimura, Y., Obuse, C., & Araki, H. (2011). Sld7, an Sld3-associated protein required for efficient chromosomal DNA replication in budding yeast. The EMBO journal, 30(10), 2019–2030.
| Cas No. | SDF | ||
| Formula | C205H272N38O67S | M.Wt | 4372.63 |
| Solubility | DMSO : 100 mg/mL (22.87 mM; Need ultrasonic; Hygroscopic DMSO has a significant impact on the solubility of product, please use newly opened DMSO) | Storage | Store at 2-8°C,Sealed storage, away from moisture and light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 228.7 μL | 1.1435 mL | 2.287 mL |
| 5 mM | 45.7 μL | 228.7 μL | 457.4 μL |
| 10 mM | 22.9 μL | 114.3 μL | 228.7 μL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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