DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) (Synonyms: 4-Amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate, DAF-FM DA) |
| Catalog No.GC33465 |
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 일산화질소(NO)를 탐지하고 생물영상화하기 위한 세포를 통과할 수 있는 형광 탐지기이다. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)탐지기는 세포 내 일산화질소(NO) 수준을 측정할 수 있고 최대 자극/방출 파장이 495/515nm이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 254109-22-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 일산화질소(NO)를 탐지하고 생물영상화하기 위한 세포를 통과할 수 있는 형광 탐지기이다. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)탐지기는 세포 내 일산화질소(NO) 수준을 측정할 수 있고 최대 자극/방출 파장이 495/515nm이다.
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 살아있는 세포의 세포막을 통과할 수 있고 세포 내 에스테르화효소에 의해 탈아세틸화되어 DAF-FM가 된다. DAF-FM은 세포 내에서 생산된 일산화질소(NO)와 반응하여 강도가 높은 형광 트리아졸 플루오레신(DAF-FMT)을 형성할 수 있고 형광 혹은 공초점 현미경으로 위치와 모니터링이 가능하고 형광 분석과 유세포 분석기로 탐지할 수 있다. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 일산화질소를 탐지하는 한계값이 약 3nM이다[1-3]. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 장어 알의 살아있는 염료로 사용되어 장어의 초기 경화 중심을 표시할 수 있다[4]. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)는 균류에서 일산화질소의 생산을 탐지하는 데 사용될 수 있다[5].
References:
[1] Kojima, H., Urano, Y., Kikuchi, K., et al.Fluorescent indicators for imaging nitric oxide productionAngew. Chem. Int. Ed. Engl.38(21)3209-3212(1999)
[2] Kojima, H., Nakatsubo, N., Kikuchi, J., et al.Detection and imaging of nitric oxide with novel fluorescent indicators: DiaminofluoresceinsAnal. Chem.70(13)2446-2453(1998)
[3] Kumari A, Bhatoee M, Singh P, et al. Detection of nitric oxide from chickpea using DAF fluorescence and chemiluminescence methods[J]. Current Protocols, 2022, 2(4): e420.
[4] Huysseune A, Larsen U G, Larionova D, et al. Bone formation in zebrafish: the significance of DAF-FM DA staining for nitric oxide detection[J]. Biomolecules, 2023, 13(12): 1780.
[5] Oiki S, Nasuno R, Urayama S, et al. Intracellular production of reactive oxygen species and a DAF-FM-related compound in Aspergillus fumigatus in response to antifungal agent exposure[J]. Scientific Reports, 2022, 12(1): 13516.
이 프로토콜은 단지 가이드이고 구체적인 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
1.염색 용액 준비
(1) 보관 용액 준비: 냉동 제품을 실온에서 해동시키고 짧은 원심 분리하여 분말을 바닥으로 농축시킵니다. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)를 무수 DMSO에 녹여 농도가 1-10mM인 보관 용액을 준비합니다.
주의: 사용하지 않은 보관 용액을 별청한 후에는 -20°C나 -80°C의 어두운 곳에 보관하여 반복 동결과 해동을 피하도록 합니다.
(2) 적당한 버퍼액（예: 무혈청은 것과 페놀 레드가 없는 배양액 또는 PBS）로 보관 용액을 희석하여 농도가 1-10μM인 작업 용액을 준비합니다.
참고:
① 실제 상황에 따라 작업 용액의 농도를 조절하고 사용하기 전에 준비하시기 바랍니다.
② 페놀 레드는 염료가 생성하는 형광 신호에 간섭할 수 있습니다. 염료 작업 용액을 준비할 때 페놀 레드가 없는 배양액을 사용합니다.
2. 세포 소생된 용액 염색（예: 여섯 개의 웰 판）
(1)소생된 용액 상태의 세포: 4°C에서 1000g으로 3-5분간 원심 분리하고 상층액을 버리고 PBS로 매 5분마다 두 번 세척합니다.
(2) 고착세포: PBS로 두 번 세척은 후 트립신을 추가하여 세포를 분해하고 분해 후 1000g으로 3-5분간 원심 분리합니다.
(3) 세포에 DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)작업 용액을 추가하여 세포를 재소생시키고 어두운 곳에서 37°C에서 0.5-1시간 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적 재배 시간이 다르므로 구체적인 실험 요구에 따라 직접 알아보아야 합니다.
(4) 배양 후 1000g으로 5분간 중심 분리하고 상층액을 제거하고 PBS로 2-3번 세척하여 매번 5분간 세척합니다.
(5) 세포를 미리 데우신 무혈청은 세포 배양액이나 PBS에 재소생시켜 형광 현미경이나 유세포 분석기로 관찰합니다.
3. 세포 접착 염색
(1) 스테일러스 커버스립에 기벽세포를 배양하십시오.
(2) 커버스립을 배양액에서 꺼내고 초과 배양액을 흡인해내고 커버스립을 습한 환경에 놓습니다.
(3) 커버스립의 한 모서리에 100μL의 염료 작업 용액을 추가하고 살짝 흔들어 염료가 모든 세포를 균일하게 덮도록 합니다.
(4) 어두운 곳에서 37°C에서 0.5-1시간 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적 재배 시간이 다르므로 구체적인 실험 요구에 따라 직접 알아보아야 합니다.
(5) 배양 후 염료 작업 용액을 흡인해내고 미리 데운 배양액으로 커버스립을 2-3번 세척합니다.
4. 현미경 탐지: DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)의 최대 흥분/방출 파장이 495/515nm입니다.
참고:
1)형광 염료 모두 꺼멜 문제가 있습니다.형광 꺼멜을 늦추기 위해 빛을 피합니다.
2)안전과 건강을 위해 수술시 실험가운과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
References:
[1] Chris D St Laurent,Tae Chul Moon,A Dean Befus. Measurement of nitric oxide in mast cells with the fluorescent indicator DAF-FM diacetate. 2015:1220:339-45. doi: 10.1007/978-1-4939-1568-2_21.
| Cas No. | 254109-22-3 | SDF | |
| Synonyms | 4-Amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate, DAF-FM DA | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=C(F)C(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C(F)=C3)C5=C1C(N)=C(NC)C=C5 | ||
| Formula | C25H18F2N2O7 | M.Wt | 496.42 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0144 mL | 10.0721 mL | 20.1442 mL |
| 5 mM | 402.9 μL | 2.0144 mL | 4.0288 mL |
| 10 mM | 201.4 μL | 1.0072 mL | 2.0144 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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