Rhodamine 123 (chloride) (Synonyms: R-22420,R-302,RH123) |
| Catalog No.GC15795 |
Rhodamine 123 (chloride)은 세포를 통과할 수 있는 양이온성 형광 탐사체로 선별적으로 미토콘드리아 막 전위를 인식하고 최대 자극/방출 광선이 507/529nm이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 62669-70-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Rhodamine 123 (chloride)은 세포를 통과할 수 있는 양이온성 형광 탐사체로 선별적으로 미토콘드리아 막 전위를 인식하고 최대 자극/방출 광선이 507/529nm이다. Rhodamine 123은 미토콘드리아 기능을 연구하고 세포 활성을 측정하고 다중 약물 저항성 (MDR) 탐지를 위한 매우 효율적인 미토콘드리아 형광 염료이다[2]. Rhodamine 123은 살아있는 세포의 미토콘드리아에 선택적으로 쌓이다. 미토콘드리아 막 전위가 정상적인 경우 그 형광 강도는 막 전기위와 양의 상관 관계를 보인다. 미토콘드리아가 약화되면 염료는 셀룰러 속으로 방출되어 형광 강도가 감소한다[3]. Rhodamine 123은 대표적인 ABC 운반체 기질이고 특히 P-고당단백질 (P-gp)이다. 다중 약물 저항성 종양 세포에서는 활발한 P-gp로 인해 이러한 세포는 Rhodamine 123을 배출하여 세포 내 형광 강도가 감소한다[4]. 일정 농도에서 Rhodamine 염료는 세포에 낮은 독성을 가지므로 동물 세포, 식물 세포, 미생물에서 미토콘드리아를 탐지하는 데 자주 사용된다[5].
References:
[1]Casto D, Le T, Glaser D D. RE: Rhodamine-123: A Novel Cationic Mitochondrial Probe[J]. 2011.
[2]Reungpatthanaphong P, Dechsupa S, Meesungnoen J, et al. Rhodamine B as a mitochondrial probe for measurement and monitoring of mitochondrial membrane potential in drug-sensitive and-resistant cells[J]. Journal of biochemical and biophysical methods, 2003, 57(1): 1-16.
[3]Shapiro H M. Membrane potential estimation by flow cytometry[J]. Methods, 2000, 21(3): 271-279.
[4]Ludescher C, Thaler J, Drach D, et al. Detection of activity of P‐glycoprotein in human tumour samples using rhodamine 123[J]. British journal of haematology, 1992, 82(1): 161-168.
[5]Zeng S, Liu X, Kafuti Y S, et al. Fluorescent dyes based on rhodamine derivatives for bioimaging and therapeutics: recent progress, challenges, and prospects[J]. Chemical Society Reviews, 2023.
이 계획은 단지 가이드를 제공하고 구체적인 필요에 맞게 수정하시기 바랍니다.
1.용액 준비
(1) 재고 용액: DMSO에 Rhodamine 123을 녹여 농도 5mM의 재고 용액을 준비합니다.
참고: 사용하지 않은 재고 용액은 -20°C나 -80°C의 어두운 곳에 나눠 보관하고 반복되는 냉동과 해동을 피하도록 합니다.
(2) 작업 용액: 적합한 버퍼 (예를 들어 무혈청은 재배 매체, HBSS 또는 PBS)로 재고 용액을 희석하여 농도가 1-20μM인 Rhodamine 123 작업 용액을 준비합니다.
참고: 실제 상황에 따라 최적의 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참고하여 구배 농도를 설정하시기 바랍니다. 작업 용액은 즉시 준비하고 사용해야 합니다.
2.세포 소생된 용액 염색 (6-웰 판을 예로 들어)
(1) 액상 세포를 1000g으로 3-5분간 원심 분리합니다. 상청을 버리고 PBS로 매번 5분간 두 번 세척합니다.
(2) 접착 세포는 PBS로 두 번 세척하여 트립신을 추가하여 세포를 분해하고 분해 후에 1000g으로 3-5분간 원심 분리합니다.
(3) 1mL의 Rhodamine 123 작업 용액을 추가하여 세포를 소생시키고 실온에서 5-30분간 어두운 곳에서 배양합니다. 서로 다른 세포에 대한 최적의 배양 기간은 각각 다릅니다.
(4) 배양 후 1000g으로 5분간 원심 분리하여 상청을 제거하고 PBS로 2-3회 매번 5분간 세척합니다.
(5) 무혈청은 세포 배양액이나 PBS에서 세포를 소생시키고 형광 현미경이나 류식 세포 검사기에 통하여 관찰합니다.
3.세포 접착 염색
(1) 멸균된 슬라이드 커버스립에 접착 세포를 배양합니다.
(2) 커버스립을 배양액에서 제거하고 과도한 배양액을 흡인하여 커버스립을 습한 환경에 배치합니다.
(3) 커버스립의 한 구석에서 100μL의 Rhodamine 123 작업 용액을 추가하고 살짝 흔들어 모든 세포를 염료로 균일하게 덮은 후 실온에서 30-60분간 어두운 곳에서 배양합니다.
(4) 염료 작업 용액을 흡인하고 배양액으로 커버스립을 2-3회 세척하여 매번 5분간 형광 현미경으로 관찰합니다.
4. Rhodamine 123을 사용하여 미토콘드리아 막 전위를 측정하기 위한 실험 단계[1]（출처 문헌, 참고용）
(1) 세포 재배 24시간 후 지정된 농도의 메틸수은 클로라이드 및/또는 피루브산을 추가한 후 다시 3시간 더 배양합니다.
(2) HBSS 버퍼로 세포를 세척하여 결합되지 않은 반응물을 제거합니다.
(3) 세포에 5μM Rhodamine 123 작업 용액 (HBSS 버퍼에 녹여)을 추가하고 실온에서 30분간 어두운 곳에서배양합니다.
(4) 600μL의 얼음 차가운 HBSS 버퍼로 배양된 세포를 수집합니다.
(5) 100μL의 세포 소생된 용액을 96-웰 판 반의 웰에 옮겨 488nm의 자극장과 530nm의 발산장으로 형광 강도를 측정합니다.
(6) 300μL의 세포 소생 용액에 있는 세포를 세어 미토콘드리아 막 전위를 표준화합니다.
참고: 모든 형광 염료는 소멸 문제가 있습니다. 빛을 피해 형광 소멸을 늦추어 주세요. 안전과 건강을 위해 수술시 실험가운과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
References:
[1] Lee J Y, Ishida Y, Takahashi T, et al. Transport of pyruvate into mitochondria is involved in methylmercury toxicity[J]. Scientific reports, 2016, 6(1): 21528.
| Cas No. | 62669-70-9 | SDF | |
| Synonyms | R-22420,R-302,RH123 | ||
| Chemical Name | 3,6-diamino-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, monochloride | ||
| Canonical SMILES | NC1=CC2=[O+]C3=C(C(C4=CC=CC=C4C(OC)=O)=C2C=C1)C=CC(N)=C3.[Cl-] | ||
| Formula | C21H17N2O3 • Cl | M.Wt | 380.8 |
| Solubility | ≤10mg/ml in ethanol;10mg/ml in DMSO;10mg/ml in dimethyl formamide;10mg/ml in HCl(0.1M) | Storage | 4°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.6261 mL | 13.1303 mL | 26.2605 mL |
| 5 mM | 0.5252 mL | 2.6261 mL | 5.2521 mL |
| 10 mM | 0.2626 mL | 1.313 mL | 2.6261 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 37 reference(s) in Google Scholar.)
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