Alexa Fluor 647 NHS ester TEAは広く使われる蛍光染料であり、第一級アミン(R-NH2)を含有する基質（タンパク質、オリゴヌクレオチドと核酸）を標識する活性化カルボキシル基を含有し、最大の励起波長は650nmで、最大の発光波長は665nmである[1-2]。N-hydroxysuccinimide (NHS)エステルは、N末端システインを含有するタンパク質と求核置換反応を起こし、新しいアミド結合を形成し、よってタンパク質の標識を実現する[3]。Alexa Fluor 647 NHS ester TEAは、直接確率的光学再構成顕微鏡(dSTORM)のイメージング条件で、優れた性能を発揮し、細胞生物イメージングと超解像顕微鏡法に広く使われている[4]。顕微鏡イメージングの条件下で、Alexa Fluor 647 NHS ester TEAの可逆的な光誘発の異性化は二種の暗色種を形成し、dSTORMにおける明滅に関連している。超解像蛍光顕微鏡に使われたAlexa Fluor 647 NHS ester TEAは、光誘発の「明滅」を発生し、光学回折限界を超える空間分解能で蛍光の位置確認を実現する。Alexa Fluor 647 NHS ester TEAの永久光退色量子収率は非常に低く、嫌気性酸化還元緩衝液で部分的に抑制できる[5]。Alexa Fluor 647 NHS ester TEAは、ファロイジンなどの標識試薬と併用し、細胞株を染色し、巨大な単層小胞(GUVs)をも染色する[6-7]。
References:
[1] Anderson GP, Nerurkar NL. Improved fluoroimmunoassays using the dye Alexa Fluor 647 with the RAPTOR, a fiber optic biosensor. J Immunol Methods. 2002;271(1-2):17-24.
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[3] Jiang H, D'Agostino GD, Cole PA, Dempsey DR. Selective protein N-terminal labeling with N-hydroxysuccinimide esters. Methods Enzymol. 2020;639:333-353.
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[5] Karlsson JKG, Laude A, Hall MJ, Harriman A. Photo-isomerization of the Cyanine Dye Alexa-Fluor 647 (AF-647) in the Context of dSTORM Super-Resolution Microscopy. Chemistry. 2019;25(65):14983-14998.
[6] Moghal MMR, Islam MZ, Sharmin S, Levadnyy V, Moniruzzaman M, Yamazaki M. Continuous detection of entry of cell-penetrating peptide transportan 10 into single vesicles. Chem Phys Lipids. 2018;212:120-129.
[7] Bharadwaj A, Kumar A, Mitra R, Jaganathan BG, Boruah BR. Enhanced fluorescence blinking of AF647 fluorophores in Mowiol via violet and UV light induced recovery for superior localization microscopy. Methods Appl Fluoresc. 2024;12(3):10.1088/2050-6120/ad4ae6.