Ferrozineは2価の鉄と反応して安定なマゼンタ色の錯体を形成し、562 nmに最大吸光度を持つ水中の鉄の直接定量に使用される。Ferrozineの第一鉄錯体の可視吸収スペクトルは、562 nmに単一の鋭いピークを示す。この波長では、モル吸光率は27,900であり、ランベルト・ベールの法則は約4 mg/LのFeまで適用される。
ISE6細胞のFerrozineアッセイ。
非ヘム鉄を測定するためのFerrozineアッセイを、ISE6細胞中の鉄濃度を測定するために適応させた。ノックダウンおよび/または鉄曝露後、細胞を回収し、上述の方法で細胞溶解液を回収した。濃塩酸（99.5%）を加え、95℃まで加熱した。室温まで冷却後、混合物を遠心分離して上清を得、これに75 mMのアスコルビン酸または水を加えた。その後、10mMFerrozineを加えた。発色を促進するために飽和酢酸アンモニウムを加えた。吸光度を550 nmで測定し、鉄-Ferrozine錯体のモル消衰係数27,900 M-1cm-1に基づき、タンパク質濃度から鉄濃度を算出した。タンパク質濃度は、Micro BCA Protein Assay Kitを用いて測定した。総鉄濃度は、アスコルビン酸塩を含む試料から計算した。第一鉄濃度はアスコルビン酸塩（還元剤）無添加の試料から計算し、第二鉄濃度は総鉄濃度と第一鉄濃度の差から計算した。
References:
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