Nitrocefin (Synonyms: Nitrocephin) |
カタログ番号GC14823
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Nitrocefinは呈色特性を持つセファロスポリン誘導体である。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 41906-86-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrocefinは呈色特性を持つセファロスポリン誘導体である[1]。β-ラクタマーゼがNitrocefinのβ-ラクタム環を加水分解する場合、化合物の色は黄色から赤色に変わり、目視を可能にする[2]。Nitrocefinは主に、細菌のβ-ラクタマーゼ活性の速やかなスクリーニングに使われる[3]。
References:
[1]. Lee M, Hesek D, Mobashery S. A practical synthesis of nitrocefin[J]. The Journal of organic chemistry, 2005, 70(1): 367-369.
[2]. Worthington R J, Melander C. Overcoming resistance to β-lactam antibiotics[J]. The Journal of organic chemistry, 2013, 78(9): 4207-4213.
[3]. Chow C, Xu H, Blanchard J S. Kinetic characterization of hydrolysis of nitrocefin, cefoxitin, and meropenem by β-lactamase from Mycobacterium tuberculosis[J]. Biochemistry, 2013, 52(23): 4097-4104.
このプロトコールは実験のガイダンスのみを提供する。実際の応用はご自分の研究対照、サンプル種類と検出プラットフォームに合わせて最適化し、調節する必要があります[1-2]。
1.試薬と材料の準備
Nitrocefin、DMSO、PBS、細菌コロニー、細菌懸濁液または溶解細胞サンプル、加水分解緩衝液
2.Nitrocefin溶液の調製
（1）貯蔵液（1–10mg/mL）：DMSOで5–10mg Nitrocefinを溶解し、よく混ぜて、暗所で保存し、-20℃で数ヶ月間保存する。
（2）作業溶液（0.5–1.0mg/mL）：PBSまたはアッセイ緩衝液で貯蔵液を0.5–1.0mg/mLに希釈する。調製後、溶液が赤色（黄色ではなく）になれば、濃度が高すぎて、更に黄色い溶液に希釈するべきだということを意味する。作業溶液は光から遠ざけて、-20℃で保存し、14日または2か月以内に使うべきである。
3.β-ラクタマーゼ活性の速やかな検出法
（1）スライドテスト：一滴の作業溶液を清潔なスライドに添加し、一つのコロニーを接種し、赤色の出現を観察する（20-30分以内）。
（2）直接接触法：コロニーに作業溶液を滴下し、20-30分以内に赤色に変わるのを観察する。
（3）細菌溶液法：3-5滴の作業溶液を1mLの細菌溶液に添加する。20-30分以内に赤色に変わるのであれば、陽性結果を示唆する。
（4）細胞溶解法：1mLの細菌溶液を超音波溶解し、3-5滴の作業溶液を添加する。40分以内に赤色に変われば、β-ラクタマーゼ活性を示唆する。
4.光度定量検出
（1）標準溶液と反応システム：Nitrocefinと加水分解緩衝液+DMSOで、標準溶液と標準勾配を調製する。
（2）サンプルの処理：固体株の遠心分離、再懸濁と超音波溶解の後、上清をアッセイのために採取した。反応混合物：サンプル+反応混合液（例：アッセイ緩衝液+Nitrocefin）を各ウェルに添加した。
（3）読み取りと算出：490nmで運動学的読み取りを行った。30-60分間、一分ごとに読み取ることを推奨する。標準曲線と時間の変化に基づき、β-ラクタマーゼの活性を算出した。
（4）単位を、1分間あたり1µmol Nitrocefinを加水分解する酵素量と定義する。
操作の注意事項
（1）操作の間に、光を避けて、よって薬物の劣化を阻止する。
（2）黄色い処方の精度を維持するために、作業液が赤色になるまでは使用しないでください。
（3）実験の条件を、各サンプル種の勾配濃度と時間で最適化するべきである。
References:
[1]. Shannon K, Phillips I. ?-Lactamase detection by three simple methods: Intralactam, nitrocefin and acidimetric[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1980, 6(5): 617-621.
[2]. Allen C, Turner C, Kalsi S, et al. Development of a rapid phenotypic test on a microfluidic device for carbapenemase detection using the chromogenic compound nitrocefin[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2020, 96(4): 114926.
| Cas No. | 41906-86-9 | SDF | |
| 同義語 | Nitrocephin | ||
| Chemical Name | (6R,7R)-3-((E)-2,4-dinitrostyryl)-8-oxo-7-(2-(thiophen-2-yl)acetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid | ||
| Canonical SMILES | [H][C@]1([C@@H]2NC(CC3=CC=CS3)=O)SCC(/C=C/C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4[N+]([O-])=O)=C(C(O)=O)N1C2=O | ||
| Formula | C21H16N4O8S2 | M.Wt | 516.5 |
| 溶解度 | 20mg/ml in DMSO, 20mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9361 mL | 9.6805 mL | 19.3611 mL |
| 5 mM | 387.2 μL | 1.9361 mL | 3.8722 mL |
| 10 mM | 193.6 μL | 968.1 μL | 1.9361 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >90.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 3 reference(s) in Google Scholar.)