eGFP est un gène rapporteur couramment utilisé. mRNA d'eGFP exprime directement la protéine en cytoplasme sans dépendre d'une activation. La vitesse d'expression de la protéine est plus vite que celle de DNA transfecté, et il n'y a pas de risque d'intégration génomique. L'expression protéique est directement liée à la quantité de mRNA. Les cellules transfectées avec mRNA d'eGFP peuvent présenter une protéine fluorescente verte forte et brillante, ses longueurs d'onde d'excitation et d'émission sont respectivement 488 nm/509 nm. mRNA d'eGFP peut être utilisé comme référence pour détecter l'efficacité de transfection de différents réactifs de transfection, et également comme témoin pour étudier la transfection et l'expression de protéines fluorescentes dans les cellules mammaliennes.
Le produit possède une structure de cap Cap1 à l'extrémité 5' et la queue poly(A) à l'extrémité 3' n simulant le processus de la maturation de mRNA dans les eucaryotes, ce qui améliore la stabilité et l'efficacité de traduction de mRNA[1]. N1-méthyl-pseudouridine (1-méthylpseudouridine, m1ψ) est une modification méthylée de la pseudouridine naturelle, formée par la pseudouridine A spécifique de N1 qui existe chez des archées et des eucaryotes. Ce qui est catalysé par la transférase de base Nep1[2]. N1-méthyl-pseudouridine est un substitut de l'uridine (U), et peut efficacement augmenter la stabilité de mRNA tout en réduisant la réponse immunitaire anti-mRNA[3].
References:
[1]. Jemielity J, Fowler T, Zuberek J, et al. Novel "anti-reverse" cap analogs with superior translational properties. RNA. 2003;9(9):1108-1122.
[2]. Callum J C Parr, et al.N 1-Methylpseudouridine substitution enhances the performance of synthetic mRNA switches in cells. 2020 Apr 6;48(6):e35. doi: 10.1093/nar/gkaa070.
[3]. Pedro Morais, Hironori Adachi, Yi-Tao Yu.The Critical Contribution of Pseudouridine to mRNA COVID-19 Vaccines. 2021 Nov 4;9:789427. doi: 10.3389/fcell.2021.789427.