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Lysing Enzymes from Arthrobacter luteus, également connue sous le nom d'enzymes de lyse de la paroi celllaire ou d'enzymes de lyse en chinois, ceux sont les hydrolases efficaces hautement qui peuvent dégrader de façon spécifique poly-β(1→3)-glucose (poly-β(1→3)-glucose) et détruire l'intégrité des parois cellulaires de levure.
Lysing Enzymes from Arthrobacter luteus coupent de manière spécifique les chaînes de poly-β(1→3)-glucose, ceux qui sont l'un des composants principaux structurels des parois cellulaires de levure. Les parois cellulaires de levure sont principalement composées de glucane, de chitine et de mannoprotéine, parmi lesquels poly-β(1→3)-glucose est le composant squelette principal de la paroi cellulaire. Les parois cellulaires de levure sont généralement difficiles à détruire par les méthodes physiques ou chimiques conventionnelles en raison de leur structure multicouche et de la formation possible de capsules ou de spores résistantes. Les enzymes de lyse d'Arthrobacter luteus réduisent significativement la force mécanique de la paroi cellulaire par l'hydrolyse ciblée des composants clés de la paroi cellulaire, ainsi donc, induire la formation de protopalstes partiels, offrir une solution efficace et douce pour la lyse cellulaire subséquente et la libération d'ADN. Dans les applications pratiques, les enzymes de lyse d'Arthrobacter luteus peuvent être utilisées pour lyser les parois cellulaires d'une variété de levures et de champignons, celles qui comprennent Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe. Les enzymes de lyse d'Arthrobacter luteus possède les avantages d'une hydrolyse efficace, d'une adaptabilité large - spectre et d'une stabilité haute[1] [2].
References:
[1] KITAMURA K, KANEKO T, YAMAMOTO Y. Lysis of viable yeast cells by enzymes of Arthrobacter luteus II. Purification and properties of an enzyme, zymolyase, which lyses viable yeast cells[J]. The Journal of General and Applied Microbiology, 1974, 20(6): 323-344.
[2] Połomska X, Kierul M, Dąbrowska A, et al. The effectiveness comparison of linear dsDNA plasmids isolation from Debaryomyces hansenii yeasts depending on cell disintegration technique[J]. Acta Scientiarum Polonorum. Biotechnology, 2014.
Protocole (Protocol)
Ce protocole fournit seulement un guide. L'application réelle doit être modifiée en fonction de vos besoins.
Préparation de protoplastes pathogènes de F. oxysporum[1]:
1.Préparation de la solution enzymatique : Dissoudre 500mg Driselase, 200mg enzymes de lyse d'Arthrobacter luteus et 200mg Snailase dans 20mL solution de 1,2M KCI pour préparer la solution d'hydrolyse enzymatique. Mélanger 1mL Tris-HCl (pH 7.5), 2mL 2.5M CaCl2, et 96mL ddH2O pour préparer le tampon sucrose - tris - calcium (STC) et le stocker dans le réfrigérateur à 4°C.
2. Traitement cellulaire : Après que F. oxysporum est cultivé dans un substrat liquide peptone - déxtrose (YPD) et que les spores sont collectées, elles sont inocubées dans un substrat YPD qui contient l'ampicilline pour une culture pendant la nuit. Puis, le mycélium est lavé de manière successive par l'eau distillée stérile et 1.2M KCl pour éliminer le substrat d'autres impuretés en prévison de l'hydrolyse enzymatique ultérieure.
3. Réaction d'incubation : Le mycélium lavé est incubé avec la solution enzymatique préparée pendant 4h à 28°C et à une vitesse de agitation de 90 rpm pour briser la paroi du mycélium et libérer les protoplastes sont séparés par la filtration et la centrifugation à 500 rpm pendant 90s à 4°C, et sont lavés trois fois par un tampon STC pour éliminer les enzymes résiduelles et l'autres impuretés.
Note :
1.Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter un tablir de laboratoire et les gants de protection lors de l'utilisation.
2.L'activité de Lysing Enzymes from Arthrobacter luteus est affectée par les facteurs comme la concentration d'ion, la température de réaction et pH. C'est recommandé de trouver la concentration optimale lors de la première utilisation.
References:
[1] Fan S, Zhou Y, Zhu N, et al. Exogenous Application of dsRNA—Inducing Silencing of the Fusarium oxysporum Tup1 Gene and Reducing Its Virulence[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2024, 25(19): 10286.
Documents produit (Product Documents)
Propriétés chimiques (Chemical Properties)
Utilisez les solutions mères dans les 6 mois si elles sont conservées à -80°C, ou dans le mois si elles sont conservées à -20°C.
Pour améliorer la solubilité, réchauffez le tube à 37°C et soniquez-le pendant une durée appropriée.
Calculateurs (Calculators)Molarité / Dilution / Masse moléculaire / Conversion d’unités
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