N4-Methyl-dCTP |
Catalog No.GB20062
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Le N4-Methyl-dCTP (N4me-dCTP) est un analogue du désoxycytidine 5'-triphosphate (dCTP) utilisé dans la synthèse de l’AND ou de l’ARN avec la PCR.
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Cas No.: 149674-24-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Le N4-Methyl-dCTP (N4me-dCTP) est un analogue du désoxycytidine 5'-triphosphate (dCTP) utilisé dans la synthèse de l’AND ou de l’ARN avec la PCR[1]. Le N4-Methyl-dCTP (200µM) améliore la sortie de la synthèse de l’AND dans les régions riches en GC[1], et il est mieux accepté par la polymérase lors de la détection de SNP[3] en surmontant les structures secondaires fortes qui interfèrent avec l’annelage des amorces[4].
References:
[1] Flores-Juárez, Cyntia R et al. “PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N4-methyl-2'-deoxycytidine 5'-triphosphate.” *BioTechniques* vol. 61,4 175-182. 1 Oct. 2016, doi:10.2144/000114457
[2] Ehrlich, M et al. “DNA methylation in thermophilic bacteria: N4-methylcytosine, 5-methylcytosine, and N6-methyladenine.” *Nucleic acids research* vol. 13,4 (1985): 1399-412. doi:10.1093/nar/13.4.1399
[3] Yang, Zunyi et al. “Eliminating primer dimers and improving SNP detection using self-avoiding molecular recognition systems.” *Biology methods & protocols* vol. 5,1 bpaa004. 10 Feb. 2020, doi:10.1093/biomethods/bpaa004
[4]Swenson, Stephanie J, and Birgit Gemeinholzer. “Testing the effect of pollen exine rupture on metabarcoding with Illumina sequencing.” *PloS one* vol. 16,2 e0245611. 2 Feb. 2021, doi:10.1371/journal.pone.0245611
Amplification PCR des régions de l’AND riches en GC utilisant l’analogue de nucléotide N4-Methyl-dCTP [1]
1. Conception des amorces :
Utiliser le programme PrimerQuest de la technologie d’AND intégrée pour la conception des amorces. Sélectionner les amorces contenant le moins possible de guanines dans leur séquence afin de minimiser la réduction de la température d’hybridation des amorces pour le modèle d’ADN contenant N4meC.
2. Procédure PCR :
2.1 Préparer le mélange PCR : 30ng d’DNA génomique humain ; 0.5µM de chaque amorce ; tampon PCR (50µM KCl ; 10µM Tris-HCl ; pH=8.3) ; 200µM de chaque désoxyribonucléotide (dATP, dGTP, dTTP, et dCTP) ou 200µM de N4me-dCTP à la place de dCTP dans le cas des amplicons modifiés ; 1.5U de Taq AND polymérase ; 2.5µM de MgCl2 ; et SYBR Green I à une concentration final de 0.4×.
2.2 Protocole de cyclage : 95°C pendant 1min ; suivi de 45 cycles de 95°C pendant 30s ; 62°C, 64°C, ou 66°C pendant 30s ; et 72°C pendant 60s; avec une extension finale à 72°C pendant 4min.
Ce protocole n’a qu’une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques
[1]Flores-Juárez, Cyntia R et al. “PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N4-methyl-2'-deoxycytidine 5'-triphosphate.” BioTechniques vol. 61,4 175-182. 1 Oct. 2016, doi:10.2144/000114457
| Cas No. | 149674-24-8 | SDF | |
| Formula | C10H18N3O13P3 (free acid) | M.Wt | 481.1 (free acid) |
| Solubility | Storage | Store at -20°C or below | |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0786 mL | 10.3928 mL | 20.7857 mL |
| 5 mM | 415.7 μL | 2.0786 mL | 4.1571 mL |
| 10 mM | 207.9 μL | 1.0393 mL | 2.0786 mL |
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.50% Appearance: A solution
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)