Dihydroethidium (Hydroethidine) (Synonyms: DHE) |
カタログ番号GC30025
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Dihydroethidium (Hydroethidine)（DHE）の酸化は、「活性酸素種（ROS）」の細胞産生をモニターする方法として一般的に用いられている。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 104821-25-2,38483-26-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Dihydroethidium (Hydroethidine)（DHE）の酸化は、「活性酸素種（ROS）」の細胞産生をモニターする方法として一般的に用いられている。通常、細胞や組織の酸化によるDHEの蛍光の変化は、顕微鏡やフローサイトメトリー、時にはHPLC分析によって測定される。Dihydroethidiumは疎水性の非荷電性化合物で、細胞外膜や細胞内膜を通過することができ、酸化されると正に荷電し、主にDNAリン酸基との静電的相互作用によって、さらに疎水性相互作用を介してDNAにインターカレートすることで細胞内に蓄積する。様々な酸化システムによるその酸化は、細胞や組織における活性酸素産生の蛍光分析にますます使用されるようになっている。ローダミンフィルターで観察されるDihydroethidium由来の赤色蛍光（励起490、発光590 nm）は、2電子酸化産物であるエチジウム化合物の形成に起因し、赤色蛍光は、過酸化水素、ペルオキシナイトライト、ヒドロキシラジカル（フェントン反応により生成）などの酸化剤ではなく、スーパーオキシド生成系（キサンチンオキシダーゼやグルコースオキシダーゼ）により特異的に得られた。
肝組織における活性酸素産生の検出
肝組織における活性酸素産生レベルは、Dihydroethidium（DHE）染色により測定した。各群の肝組織の凍結切片（厚さ5μm）を作製し、DHE（7.5mM）と共に37℃の暗所で30分間インキュベートした。DAPIで染色後、切片を蛍光顕微鏡で観察した。
References:
[1]. Wagner B A, Buettner G R. Quantitative Changes in Dihydroethidium (DHE) Oxidation Products from Isolated Mitochondria While Respiring on Select Substrates and the Effects Mitochondrial Inhibitors Commonly Used in Bioenergetic Profiling[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2016, 100: S31.
[2]. Garbett N C, Hammond N B, Graves D E. Influence of the amino substituents in the interaction of ethidium bromide with DNA[J]. Biophysical journal, 2004, 87(6): 3974-3981.
[3]. Benov L, Sztejnberg L, Fridovich I. Critical evaluation of the use of hydroethidine as a measure of superoxide anion radical[J]. Free Radical Biology and Medicine, 1998, 25(7): 826-831.
[4]. Biemond P, Swaak A J G, Beindorff C M, et al. Superoxide-dependent and-independent mechanisms of iron mobilization from ferritin by xanthine oxidase. Implications for oxygen-free-radical-induced tissue destruction during ischaemia and inflammation[J]. Biochemical Journal, 1986, 239(1): 169-173.
[5]. Zheng J, Chen L, Lu T, et al. MSCs ameliorate hepatocellular apoptosis mediated by PINK1-dependent mitophagy in liver ischemia/reperfusion injury through AMPKα activation[J]. Cell death & disease, 2020, 11(4): 1-19.
このプランはあくまでガイドラインであり、具体的なニーズに合わせて修正してください。
1. 染色液の調製
(1) 原液の調製：DMSOにDihydroethidiumを溶解し、1～10mMの濃度になるようにストック溶液を調製する。
注意：
①凍結融解を繰り返さないよう、-20℃または-80℃の暗所に保存する；
②本品は酸化しやすい。ストック中はなるべく空気に触れないようにする。特に溶液の場合は窒素またはアルゴン下で保存する必要がある。
(2) 作業溶液を調製する： ストック溶液を適当な緩衝液（無血清培地、PBS 等）で希釈し、1～10μM 濃度の作業溶液を調製する。
注意：作業溶液の濃度は実情に応じて調整し、今すぐ調製してください。
2. 細胞浮遊液の染色
(1)懸濁細胞：1000g、3～5分間、4℃で遠心し、上清を捨て、PBSで5分間ずつ2回洗浄する。
(2)接着細胞：PBSで2回洗浄し、トリプシンを加えて細胞を消化し、消化終了後1000gで3～5分間遠心する。
(3) Dihydroethidium作業溶液を加えて細胞を再懸濁し、室温、暗所で5～30分間インキュベートする。細胞によって最適なインキュベーション時間は異なるので、具体的な実験ニーズに応じて各自で検討してください。
(4) インキュベーション後、1000gで5分間遠心し、上清を除去した後、PBSを加えて2-3回洗浄する。
(5) 細胞をあらかじめ温めた無血清細胞培養液またはPBSに懸濁し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで観察する。
3. 細胞接着染色
(1) 滅菌カバースリップ上で接着細胞を培養する。
(2) カバースリップを培養液から取り出し、余分な培養液を吸引し、カバースリップを加湿器中に置く。
(3) カバースリップの片隅から100μLの色素作業溶液を加え、軽く振ってすべての細胞を均一に色素で覆う。
(4) 室温、暗所で5～30分間インキュベートする。細胞によって最適なインキュベーション時間は異なるので、特定の実験ニーズに応じて各自で検討してください。
(5) インキュベーション後、色素処理液を捨て、あらかじめ温めておいた培養液でカバースリップを2～3回洗浄する。
4. 顕微鏡による検出： Dihydroethidiumの最大励起/発光波長は 518/616nm である。
注意事項
Dihydroethidium は光に非常に弱いので、蛍光消光を遅らせるためにできるだけ光を避けて下さい；
Dihydroethidiumは酸化後にエチジウム化合物を生成し、強い毒性を示します。安全と健康のため、操作時には白衣と使い捨て手袋を着用してください。
| Cas No. | 104821-25-2,38483-26-0 | SDF | |
| 同義語 | DHE | ||
| Canonical SMILES | NC1=CC=C2C3=C(C=C(N)C=C3)C(C4=CC=CC=C4)N(CC)C2=C1 | ||
| Formula | C21H21N3 | M.Wt | 315.41 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 50 mg/mL (158.52 mM);Water : < 0.1 mg/mL (insoluble) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.1705 mL | 15.8524 mL | 31.7048 mL |
| 5 mM | 634.1 μL | 3.1705 mL | 6.341 mL |
| 10 mM | 317 μL | 1.5852 mL | 3.1705 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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