H2DCFDA (DCFH-DA)

H2DCFDA (DCFH-DA)は、酸化還元感受性の蛍光プローブであり、細胞内の反応性酸素種（ROS）レベルを測定するために使用される。細胞内ROS生成レベルを測定する最も一般的な方法は、2′,7′-ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（H2DCFDA（DCFH-DA））アッセイである。

蛍光性染料H2DCFDA（DCFH-DA）は、ROSの生成を検出するために使用される。通常、細胞内に拡散した後、H2DCFDA（DCFH-DA）は細胞エステラーゼによって脱アセチル化され、次にROSによって2′,7′-ジクロロフルオレセイン（DCF）に酸化される非蛍光化合物に変換されます。TBBPA単独でH2DCFDA（DCFH-DA）をその蛍光生成物DCFに変換する能力を評価するためのin vitro実験は、セルフリーのモデルで行われた。5 μMのH2DCFDA（DCFH-DA）の希釈液と、TBBPA（0.1–100 μM）の濃度を含む96ウェルプレートに、Ca2+およびMg2+を含まないPBSバッファーまたは無血清DMEM/F12またはDMEM/F12に5% FBSを補充したものを100 μLの最終体積で加えた。TBBPAの添加後、30分および60分後に蛍光を測定した。脱アセチル化および酸化されたH2DCFDA（DCFH-DA）：DCFの蛍光は、最大励起および放出スペクトルでそれぞれ485および535 nmで検出された。このin vitro研究では、細胞が存在しないPBSバッファー、DMEM/F12、およびDMEM/F12に5%のFBSメディアでのH2DCFDA（DCFH-DA）蛍光へのTBBPAの影響を調べた。得られた結果は、TBBPAがすべての試験濃度でPBSバッファー中のH2DCFDA（DCFH-DA）と相互作用し、蛍光の有意な増加を引き起こしたことを示した。H2DCFDA（DCFH-DA）アッセイは、TBBPAを使用した細胞培養実験には使用できない。結果は、H2DCFDA（DCFH-DA）アッセイを使用してTBBPAによるROS生成に関するデータは、異なる方法を使用して再検討する必要があることを示唆している。

References:
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