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PPACK

Catalog No.: GC44671Purity:>98.00%Synonyms: Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone
COASDSData Sheet
PPACKは、0.24nMのKi値でヒトαトロンビンを阻害する強力な選択的および不可逆的なトロンビン阻害剤である。

製品は研究用途にのみ使用できます。人体には使用できません。患者への販売は行っておりません。

PPACK
Cas No.: 71142-71-7
1mgIn Stock
$38.00
1
5mgIn Stock
$160.00
1
10mgIn Stock
$283.00
1
25mgIn Stock
$660.00
1
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製品説明 (Description)

PPACKは、0.24nMのKi値でヒトαトロンビンを阻害する強力な選択的および不可逆的なトロンビン阻害剤である。PPACKは、体外でrt-PAの血漿プロテアーゼ阻害剤への結合を阻害する[1-3]。トロンビン活性部位Serに共有結合を形成し、活性部位でHis57と架橋して四面体PPack-トロンビン複合体を形成する。PPACKは、フィブリン分解産物、プラスミノーゲン、α 2-アンチプラスミンの変化を完全に阻害した[4-6]。

 

PPACK(0.2 mM;2h)との共インキュベーションにより、ウシ大動脈内皮細胞におけるプラスミンによる内皮透過性の増加が59%減少した[7]。ヘムオキシゲナーゼ(HO)-1は、ヘム分解におけるストレス誘発性律速酵素であり、酸化的損傷に対する細胞保護を付与する。PPACK(24時間; 30 nM)による細胞の前処理は、HO-1発現に対するトロンビンの増強効果に効果的に拮抗した[8]。

 

PPACK(ボーラス用量10-100μg/kgまたは注入0.25-1.0μg/kg/分)前処理は、ウサギのトロンビン誘発性脳血栓塞栓症を抑制することができる[9]。

References:

[1]. Mohler MA, Refino CJ, et,al. D-Phe-Pro-Arg-chloromethylketone: its potential use in inhibiting the formation of in vitro artifacts in blood collected during tissue-type plasminogen activator thrombolytic therapy. Thromb Haemost. 1986 Oct 21;56(2):160-4. PMID: 2433785.

[2]. Bode W, Mayr I, et,al. The refined 1.9 A crystal structure of human alpha-thrombin: interaction with D-Phe-Pro-Arg chloromethylketone and significance of the Tyr-Pro-Pro-Trp insertion segment. EMBO J. 1989 Nov;8(11):3467-75. doi: 10.1002/j.1460-2075.1989.tb08511.x. PMID: 2583108; PMCID: PMC401503.

[3]. Lyon ME, Fine JS, et,al. D-phenylalanyl-L-prolyl-L-arginine chloromethyl ketone (PPACK): alternative anticoagulant to heparin salts for blood gas and electrolyte specimens. Clin Chem. 1995 Jul;41(7):1038-41. PMID: 7600685.

[4]. Kovach IM, Kelley P, et,al. Proton bridging in the interactions of thrombin with small inhibitors. Biochemistry. 2009 Aug 4;48(30):7296-304. doi: 10.1021/bi900098s. PMID: 19530705; PMCID: PMC2800789.

[5]. Kettner C, Shaw E. D-Phe-Pro-ArgCH2C1-A selective affinity label for thrombin. Thromb Res. 1979;14(6):969-73. doi: 10.1016/0049-3848(79)90014-8. PMID: 473131.

[6]. Nienaber VL, Mersinger LJ, et,al. Structure-based understanding of ligand affinity using human thrombin as a model system. Biochemistry. 1996 Jul 30;35(30):9690-9. doi: 10.1021/bi952164b. PMID: 8703940.

[7]. Rabbani LE, Johnstone MT, et,al. PPACK attenuates plasmin-induced changes in endothelial integrity. Thromb Res. 1993 Jun 15;70(6):425-36. doi: 10.1016/0049-3848(93)90085-3. PMID: 8362368.

[8].Liu JF, Hou SM, et,al. Thrombin induces heme oxygenase-1 expression in human synovial fibroblasts through protease-activated receptor signaling pathways. Arthritis Res Ther. 2012 Apr 27;14(2):R91. doi: 10.1186/ar3815. PMID: 22541814; PMCID: PMC3446465.
[9]. Liu JT, Paul W, et,al. Thrombin inhibitors and anti-coagulants on thrombin-induced embolisation in rabbit cranial vasculature. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 24;264(2):183-90. doi: 10.1016/0014-2999(94)00464-1. PMID: 7851481.

実験プロトコル (Protocol)

細胞実験[1]:

細胞株

ウシ大動脈内皮細胞

準備方法

ポリカーボネート膜クラスタープレートに播種してから3～5日後に、コンフルエントなウシ大動脈内皮細胞単層が得られた。細胞はプラスミノーゲンとプラスミノーゲン活性化剤で処理された。PPACKが上部コンパートメントに追加された。その後、単層膜を5％CO2/95％O2雰囲気下で2時間インキュベートした。

反応条件

0.2 mM;2h

アプリケーション

PPACKとの共培養により、プラスミンによる内皮透過性の増加が59%減少した。

細胞実験[1]:

細胞株

ヒト変形性関節症滑膜線維芽細胞(OASF)

準備方法

細胞をトロンビン（3U/ml）、トロンビンとPPACK（30nM）で24時間処理した。

反応条件

24時間;30 nM

アプリケーション

PPACKで細胞を前処理すると、HO-1発現に対するトロンビンの増強作用に効果的に拮抗した。

動物実験 [2]:

動物モデル

オスのウサギ

準備方法

PPACKは生理食塩水で調製され、10～100μg/kgのボーラス投与または0.25～1.0μg/kg/分の点滴投与で投与された。ウサギはトロンビン投与の1分前か後にPPACKをボーラス投与されるか、トロンビン投与の30分前からPPACKを注入され、0.1mL/分の速度で1時間続けられた。

投与形態

アプリケーション

PPACK前処置はウサギにおける血栓誘発性脳血栓塞栓症を抑制できる。

キナーゼ実験 [3]:

準備方法

トロンビンのストック溶液を適切なバッファーで希釈し、3-5×10-10濃度の20mL溶液を得た。980μL のアリコートを分光光度計の温度制御セル コンパートメント内のキュベットでインキュベートし、熱平衡に達した。トロンビン阻害は、熱平衡化した1.1×10-7～3.65×10-7M PPACK溶液を10μL注入し、混合することにより開始した。反応混合物を15～200秒間速やかにインキュベートし、その後、DMSO中の基質の3～5×10-3 M溶液10μLを素早く添加して、残存酵素活性を測定した。擬一次速度定数は、10回の連続したインキュベーション時間について、酵素活性の残量対阻害時間に指数関数を当てはめて計算した。 トロンビンの活性は、288～308Kの温度範囲での実験期間中一定のままであった。

反応条件

アプリケーション

PPACKは、ヒトαトロンビンを0.24nMのKi値で阻害する強力な選択的かつ不可逆的なトロンビン阻害剤である。

参考文献:

[1]. Kovach IM, Kelley P, et,al. Proton bridging in the interactions of thrombin with small inhibitors. Biochemistry. 2009 Aug 4;48(30):7296-304. doi: 10.1021/bi900098s. PMID: 19530705; PMCID: PMC2800789.

[2]. Rabbani LE, Johnstone MT, et,al. PPACK attenuates plasmin-induced changes in endothelial integrity. Thromb Res. 1993 Jun 15;70(6):425-36. doi: 10.1016/0049-3848(93)90085-3. PMID: 8362368.

[3].Liu JF, Hou SM, et,al. Thrombin induces heme oxygenase-1 expression in human synovial fibroblasts through protease-activated receptor signaling pathways. Arthritis Res Ther. 2012 Apr 27;14(2):R91. doi: 10.1186/ar3815. PMID: 22541814; PMCID: PMC3446465.

[4]. Liu JT, Paul W, et,al. Thrombin inhibitors and anti-coagulants on thrombin-induced embolisation in rabbit cranial vasculature. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 24;264(2):183-90. doi: 10.1016/0014-2999(94)00464-1. PMID: 7851481.

製品資料 (Product Documents)

Purity:>98.00%Appearance:A solid
COASDSData Sheet

生物学的データ (Biological Data)

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化学的性質 (Chemical Properties)

CAS番号
71142-71-7
同義語
Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone
化学名
D-phenylalanyl-N-[(1S)-4-[(aminoiminomethyl)amino]-1-(2-chloroacetyl)butyl]-L-prolinamide, trifluoroacetate salt
SMILES
O=C([C@H](N)CC1=CC=CC=C1)N2[C@H](C(N[C@H](C(CCl)=O)CCCNC(N)=N)=O)CCC2
分子式
C21H31ClN6O3
分子量
451
溶解性
20mg/mL in ethanol, 33mg/mL in DMSO, or in DMF
保存条件
Store at -20°C
一般的な注意事項
製品の溶解性データに基づいて適切な溶媒を選択してください。調製後は、凍結融解の繰り返しを避けるため、ストック溶液を小分けしてください。
ストック溶液は、-80°Cで保存する場合は6か月以内、-20°Cで保存する場合は1か月以内に使用してください。
溶解性を高めるには、チューブを37°Cに温め、適切な時間超音波処理してください。
配送条件
評価用サンプルは保冷剤とともに発送します。その他の容量は室温で発送し、ご要望に応じて保冷剤を同梱します。

計算ツール (Calculators)モル濃度 / 希釈 / 分子量 / 単位変換 / in vivo製剤 / 溶解度

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