PPACK (Synonyms: Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone) |
カタログ番号GC44671
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PPACKは、0.24nMのKi値でヒトαトロンビンを阻害する強力な選択的および不可逆的なトロンビン阻害剤である。
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Cas No.: 71142-71-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
PPACKは、0.24nMのKi値でヒトαトロンビンを阻害する強力な選択的および不可逆的なトロンビン阻害剤である。PPACKは、体外でrt-PAの血漿プロテアーゼ阻害剤への結合を阻害する[1-3]。トロンビン活性部位Serに共有結合を形成し、活性部位でHis57と架橋して四面体PPack-トロンビン複合体を形成する。PPACKは、フィブリン分解産物、プラスミノーゲン、α 2-アンチプラスミンの変化を完全に阻害した[4-6]。
PPACK(0.2 mM;2h)との共インキュベーションにより、ウシ大動脈内皮細胞におけるプラスミンによる内皮透過性の増加が59%減少した[7]。ヘムオキシゲナーゼ(HO)-1は、ヘム分解におけるストレス誘発性律速酵素であり、酸化的損傷に対する細胞保護を付与する。PPACK(24時間; 30 nM)による細胞の前処理は、HO-1発現に対するトロンビンの増強効果に効果的に拮抗した[8]。
PPACK(ボーラス用量10-100μg/kgまたは注入0.25-1.0μg/kg/分)前処理は、ウサギのトロンビン誘発性脳血栓塞栓症を抑制することができる[9]。
References:
[1]. Mohler MA, Refino CJ, et,al. D-Phe-Pro-Arg-chloromethylketone: its potential use in inhibiting the formation of in vitro artifacts in blood collected during tissue-type plasminogen activator thrombolytic therapy. Thromb Haemost. 1986 Oct 21;56(2):160-4. PMID: 2433785.
[2]. Bode W, Mayr I, et,al. The refined 1.9 A crystal structure of human alpha-thrombin: interaction with D-Phe-Pro-Arg chloromethylketone and significance of the Tyr-Pro-Pro-Trp insertion segment. EMBO J. 1989 Nov;8(11):3467-75. doi: 10.1002/j.1460-2075.1989.tb08511.x. PMID: 2583108; PMCID: PMC401503.
[3]. Lyon ME, Fine JS, et,al. D-phenylalanyl-L-prolyl-L-arginine chloromethyl ketone (PPACK): alternative anticoagulant to heparin salts for blood gas and electrolyte specimens. Clin Chem. 1995 Jul;41(7):1038-41. PMID: 7600685.
[4]. Kovach IM, Kelley P, et,al. Proton bridging in the interactions of thrombin with small inhibitors. Biochemistry. 2009 Aug 4;48(30):7296-304. doi: 10.1021/bi900098s. PMID: 19530705; PMCID: PMC2800789.
[5]. Kettner C, Shaw E. D-Phe-Pro-ArgCH2C1-A selective affinity label for thrombin. Thromb Res. 1979;14(6):969-73. doi: 10.1016/0049-3848(79)90014-8. PMID: 473131.
[6]. Nienaber VL, Mersinger LJ, et,al. Structure-based understanding of ligand affinity using human thrombin as a model system. Biochemistry. 1996 Jul 30;35(30):9690-9. doi: 10.1021/bi952164b. PMID: 8703940.
[7]. Rabbani LE, Johnstone MT, et,al. PPACK attenuates plasmin-induced changes in endothelial integrity. Thromb Res. 1993 Jun 15;70(6):425-36. doi: 10.1016/0049-3848(93)90085-3. PMID: 8362368.
[8].Liu JF, Hou SM, et,al. Thrombin induces heme oxygenase-1 expression in human synovial fibroblasts through protease-activated receptor signaling pathways. Arthritis Res Ther. 2012 Apr 27;14(2):R91. doi: 10.1186/ar3815. PMID: 22541814; PMCID: PMC3446465.
[9]. Liu JT, Paul W, et,al. Thrombin inhibitors and anti-coagulants on thrombin-induced embolisation in rabbit cranial vasculature. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 24;264(2):183-90. doi: 10.1016/0014-2999(94)00464-1. PMID: 7851481.
| 細胞実験[1]: | |
細胞株 | ウシ大動脈内皮細胞 |
準備方法 | ポリカーボネート膜クラスタープレートに播種してから3～5日後に、コンフルエントなウシ大動脈内皮細胞単層が得られた。細胞はプラスミノーゲンとプラスミノーゲン活性化剤で処理された。PPACKが上部コンパートメントに追加された。その後、単層膜を5％CO2/95％O2雰囲気下で2時間インキュベートした。 |
反応条件 | 0.2 mM;2h |
アプリケーション | PPACKとの共培養により、プラスミンによる内皮透過性の増加が59%減少した。 |
| 細胞実験[1]: | |
細胞株 | ヒト変形性関節症滑膜線維芽細胞(OASF) |
準備方法 | 細胞をトロンビン（3U/ml）、トロンビンとPPACK（30nM）で24時間処理した。 |
反応条件 | 24時間;30 nM |
アプリケーション | PPACKで細胞を前処理すると、HO-1発現に対するトロンビンの増強作用に効果的に拮抗した。 |
| 動物実験 [2]: | |
動物モデル | オスのウサギ |
準備方法 | PPACKは生理食塩水で調製され、10～100μg/kgのボーラス投与または0.25～1.0μg/kg/分の点滴投与で投与された。ウサギはトロンビン投与の1分前か後にPPACKをボーラス投与されるか、トロンビン投与の30分前からPPACKを注入され、0.1mL/分の速度で1時間続けられた。 |
投与形態 | |
アプリケーション | PPACK前処置はウサギにおける血栓誘発性脳血栓塞栓症を抑制できる。 |
| キナーゼ実験 [3]: | |
準備方法 | トロンビンのストック溶液を適切なバッファーで希釈し、3-5×10-10濃度の20mL溶液を得た。980μL のアリコートを分光光度計の温度制御セル コンパートメント内のキュベットでインキュベートし、熱平衡に達した。トロンビン阻害は、熱平衡化した1.1×10-7～3.65×10-7M PPACK溶液を10μL注入し、混合することにより開始した。反応混合物を15～200秒間速やかにインキュベートし、その後、DMSO中の基質の3～5×10-3 M溶液10μLを素早く添加して、残存酵素活性を測定した。擬一次速度定数は、10回の連続したインキュベーション時間について、酵素活性の残量対阻害時間に指数関数を当てはめて計算した。 トロンビンの活性は、288～308Kの温度範囲での実験期間中一定のままであった。 |
反応条件 | |
アプリケーション | PPACKは、ヒトαトロンビンを0.24nMのKi値で阻害する強力な選択的かつ不可逆的なトロンビン阻害剤である。 |
参考文献: [1]. Kovach IM, Kelley P, et,al. Proton bridging in the interactions of thrombin with small inhibitors. Biochemistry. 2009 Aug 4;48(30):7296-304. doi: 10.1021/bi900098s. PMID: 19530705; PMCID: PMC2800789. [2]. Rabbani LE, Johnstone MT, et,al. PPACK attenuates plasmin-induced changes in endothelial integrity. Thromb Res. 1993 Jun 15;70(6):425-36. doi: 10.1016/0049-3848(93)90085-3. PMID: 8362368. [3].Liu JF, Hou SM, et,al. Thrombin induces heme oxygenase-1 expression in human synovial fibroblasts through protease-activated receptor signaling pathways. Arthritis Res Ther. 2012 Apr 27;14(2):R91. doi: 10.1186/ar3815. PMID: 22541814; PMCID: PMC3446465. [4]. Liu JT, Paul W, et,al. Thrombin inhibitors and anti-coagulants on thrombin-induced embolisation in rabbit cranial vasculature. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 24;264(2):183-90. doi: 10.1016/0014-2999(94)00464-1. PMID: 7851481. | |
| Cas No. | 71142-71-7 | SDF | |
| 同義語 | Pebac, D-Phenylalanyl-prolyl-arginyl Chloromethyl Ketone | ||
| Chemical Name | D-phenylalanyl-N-[(1S)-4-[(aminoiminomethyl)amino]-1-(2-chloroacetyl)butyl]-L-prolinamide, trifluoroacetate salt | ||
| Canonical SMILES | O=C([C@H](N)CC1=CC=CC=C1)N2[C@H](C(N[C@H](C(CCl)=O)CCCNC(N)=N)=O)CCC2 | ||
| Formula | C21H31ClN6O3 | M.Wt | 451 |
| 溶解度 | 20mg/mL in ethanol, 33mg/mL in DMSO, or in DMF | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.2173 mL | 11.0865 mL | 22.1729 mL |
| 5 mM | 443.5 μL | 2.2173 mL | 4.4346 mL |
| 10 mM | 221.7 μL | 1.1086 mL | 2.2173 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
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