CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester) |
Catalog No.GC14056
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CFDA-SE는 세포 투과성 형광 염료로 세포 내 세포골격 단백질의 자유롭게 아미노기와 비가역적인 공유하게 결합을 해서 가수분해할 때 녹색 형광을 방출한다.
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Cas No.: 150347-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
CFDA-SE는 세포 투과성 형광 염료로 세포 내 세포골격 단백질의 자유롭게 아미노기와 비가역적인 공유하게 결합을 해서 가수분해할 때 녹색 형광을 방출한다. 세포 분열해 시 CFDA-SE의 형광은 딸세포에 균등하게 분배되어 분열할 때마다 형광 강도가 절반으로 줄어들고 그 감소는 세포 분열 횟수에 비례한다[3,4]. CFDA-SE는 488/518nm의 Ex/Em 파장에서 검출할 수 있고 세포 증식 분석 및 생세포 추적에 일반적으로 사용된다[5,6,7].
1.염색 용액의 조제
(1) 원액의 조제: CFDA-SE를 DMSO에 녹여 보통 10mM 농도의 모액을 만듭니다. 모액은 소분해서 -20°C 또는 -80°C에서 빛을 차단하고 보관하는 것이 권장됩니다. 반복적인 동결-해동은 피하도록 합니다.
(2) 작업 용액의 조제: 모액을 무혈청 배앵지 또는 PBS로 희석해서 1-10μM의 작업 용액을 조제합니다. CFDA-SE는 수용액에서 빠르게 가수분해되므로 작업 용액은 사용 직전에 조제해야 합니다. 혈청 및 배양지에 포함된 단백질은 CFDA-SE와 결합을 경쟁해서 표지 효율을 현저하게 떨어뜨립니다. 게다가 작업 용액 조제 및 표지 과정은 반드시 무혈청 조건에서 엄격하게 수행해야 합니다.
2. 부유 세포 염색
(1) 세포 수집: 4℃에서 1000×g으로 3-5분 동안 원심분리한 후 상청액을 버리고37℃로 예열한 무혈청 PBS로 세포를 2회 세척합니다 (각 5분).
(2) 세포 밀도 조절: 무혈청 PBS에 세포를 재부유시킨 후 밀도를 1×10⁶-1×10⁷ 세포/mL로 조절합니다.
(3) 염색: CFDA-SE 작업 용액을 첨가하고(최종 농도가 작업 농도에 도달하도록 함) 빠르고 부드럽게 혼합합니다.
(4) 배양: 세포 소생된 용액을 37℃에서 암조건 (빛을 차단한 상태)으로 10-30분 동안 배양합니다. 최적의 배양 시간은 세포 종류에 따라 다르고 특정 실험 요구사항에 따라 경험적으로 결정해야 합니다.
(5) 세척 및 재소생시킴: 배양 후 1000×g으로 5분 동안 원심분리해서 상청액을 버리고 잔류하는 유리 염료를 제거하기 위해 PBS로 2회 세척합니다 (각 5분).
3. 부착 세포의 염색 (부유 세포 표지법)
(1) 세포 수집: 배양지를 제거하고 PBS로 세포를 2회 세척한 후 트립신을 사용해서 세포를 탈리시킵니다. 소화 후 1000×g으로 3-5분 동안 원심분리합니다.
(2) "부유 세포의 염색"의 (2)~(5)단계에 따라 진행합니다.
4. 부착 세포의 염색 (현장 표지법)
(1) 배양: 세포를 판에 배양해서 약 60%-80%의 융합도에 도달할 때 까지 배양합니다.
(2) 세척: 기존 배양지를 제거하고 37℃로 예열한 무혈청 PBS로 세포를 2회 세척합니다.
(3) 배양: 실험 요구사항에 따라 CFDA-SE 작업 용액을 세포가 충분하게 덮일 정도로만 첨가합니다. 37℃에서 암조건 (빛을 차단한 상태)으로 10-30분 동안 배양합니다. 최적의 배양 시간은 세포 종류에 따라 다르므로 경험적으로 결정해야 합니다.
(4) 세척: 염색 작업 용액을 흡인해서 제거한 후 PBS로 세포를 2회 세척합니다.
5. 검출
실험 목적에 따라 필요 시 세포를 분리시킨 후 여기/방출 (Ex/Em) 파장 488/518nm 조건에서 형광 현미경으로 관찰하거나 유세포 분석기로 분석합니다.
주의 사항:
(1) 세포 내 에스테라 활성은 세포 종류에 따라 다르므로 염색 효율에 차이가 발생할 수 있습니다.
(2) 형광 염료는 광표백에 취약합니다. 염색 절차 전반에 걸쳐 반드시 빛을 차단해서 보호해야 합니다.
| Cas No. | 150347-59-4 | SDF | |
| Synonyms | 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester | ||
| Chemical Name | 5-(((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)carbonyl)-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diyl diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(OC(C2=CC=C(C3(C(C=CC(OC(C)=O)=C4)=C4OC5=C3C=CC(OC(C)=O)=C5)OC6=O)C6=C2)=O)C(CC1)=O | ||
| Formula | C29H19NO11 | M.Wt | 557.46 |
| Solubility | ≥ 37.2mg/mL in DMSO with ultrasonic | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.7939 mL | 8.9693 mL | 17.9385 mL |
| 5 mM | 358.8 μL | 1.7939 mL | 3.5877 mL |
| 10 mM | 179.4 μL | 896.9 μL | 1.7939 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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