FeRhoNox-1(Fe2+ indicaton)

이 계획은 단지 가이드를 제공하고 구체적인 필요에 맞게 수정하시기 바랍니다.

1.염색 용액 준비

(1) 재고 용액 준비: FeRhoNox-1을 DMSO에 녹여 1-10mM 농도의 재고 용액을 준비합니다.

참고: 사용하지 않은 재고 용액은 반복되는 냉동과 해동을 피하기 위해 -20°C나 -80°C의 어두운 곳에 나누어 저장해야 합니다.

(2) 작업 용액 준비: 적합한 버퍼(예: 혈청과 페놀 red-free 문화 매체나 PBS)로 재고 용액을 희석하고 1-10μM 농도의 작업 용액을 준비합니다.

참고: 실제 상황에 따라 작업 용액의 농도를 조정하고 사용하도록 준비하시기 바랍니다.

2.세포 소생된 용액 염색

(1)소생된 세포: 4°C에서 1000g으로 3-5분간 세포를 중심으로 회전하고 상층액을 버리고 PBS로 5분마다 두 번 세척합니다.

(2) 부착 세포: PBS로 두 번 세척은 후 트립신을 추가하여 세포를 분해하고 분해가 완료된 후 1000g으로 3-5분간 원심 분리합니다.

(3) FeRhoNox-1 작업 용액을 추가하여 세포를 재소생시키고 37°C의 어두운 곳에서 5-30분 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적 배양 시간은 다르고 구체적인 실험 요구에 따라 스스로 탐색하시기 바랍니다.

(4) 배양 후 1000g으로 5분간 원심 분리한 상층액을 제거하고 PBS를 추가하여 2-3회, 매번 5분간 세척하시기 바랍니다.

(5) 미리 데웠던 세럼이 없는 세포 문화 매체나 PBS에서 세포를 재소생시키고 형광 현미경이나 유세포 분석기로 관찰합니다.

3.세포 부착 염색

(1) 멸균된 슬라이드에 부착 세포를 재배양합니다.

(2) 슬라이드를 문화 매체에서 제거하고 과도한 문화 매체를 흡인하여 슬라이드를 습한 환경에 놓습니다.

(3) 슬라이드의 한 구석에 염색 작업 용액 100 μL을 추가하고 살짝 흔들어 모든 세포를 염색 용액으로 균일하게 덮으세요.

(4) 37°C의 어두운 곳에서 5-30분 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적 배양 시간은 다르고 구체적인 실험 요구에 따라 스스로 탐색하시기 바랍니다.

(5) 배양 후 염색 작업 용액을 버리고 미리 데웠던 문화 용액으로 슬라이드를 2-3회 세척합니다.

4.현미경 탐지: FeRhoNox-1의 최대 흥분 파장과 발광 파장은 각각 540/575nm입니다.

주의 사항:

1)형광 염료 모두 꺼끄러운 문제가 있습니다. 형광 꺼끄러움을 늦추기 위해 최대한 빛을 피하시기 바랍니다.

2)안전과 건강을 위해 실험복과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.