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Alexa fluor 647 NHS ester

Catalog No.: GC74214Purity:>95.00%
COASDSData Sheet
Alexa Fluor 647 NHS ester TEA es un tinte fluorescente ampliamente utilizado que contiene un grupo carboxilo activado para etiquetar sustratos con aminas primarias (R-NH2), como proteínas, oligonucleotides y ácidos nucleicos, y tiene una longitud de onda de excitación máxima de 650nm y una longitud de onda máxima de emisión de 665nm

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Alexa fluor 647 NHS ester
Cas No.: 1620475-28-6
1mgIn Stock
$338.00
1
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Citas (Citations)

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  • Nature cover
    Nature
    641, 529–536 (2025)
  • Nature cover
    Nature
    628, 630–638 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    632, 686–694 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    618, 1017–1023 (2023)
  • Nature cover
    Nature
    610, 366–372 (2022)
  • Cell cover
    Cell
    187(9):2288-2304 (2024)
  • Cell cover
    Cell
    183(7):1867-1883 (2020)
  • Science cover
    Science
    388(6745) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6739) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6734) (2025)
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    Cell Research
    35, 97–116 (2025)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    34, 683–706 (2024)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 273–287 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 546–561 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 904–922 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    31, 1291–1307 (2021)

Descripción (Description)

Alexa Fluor 647 NHS ester TEA es un tinte fluorescente ampliamente utilizado que contiene un grupo carboxilo activado para etiquetar sustratos con aminas primarias (R-NH2), como proteínas, oligonucleotides y ácidos nucleicos, y tiene una longitud de onda de excitación máxima de 650nm y una longitud de onda máxima de emisión de 665nm[1-2]. N-hydroxysuccinimide (NHS) esters pueden sufrir reacciones de sustitución nucleofílica con proteínas que contienen una cisteína N-terminal, formando nuevos enlaces amida y permitiendo así el etiquetado de proteínas [3]. Alexa Fluor 647 NHS ester TEA funciona bien en condiciones de imagen de Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy (dSTORM) y es ampliamente utilizado para bioimagen celular y microscopía de superresolución [4]. Bajo condiciones de imagen de microscopio, la isomerización fotoinducida reversible del Alexa Fluor 647 NHS ester TEA utilizado en la microscopía de fluorescencia de superresolución sufre un “parpadeo” inducido por la luz, lo que permite la localización de fluoróforos con resolución espacial más allá del lñimite de difracción óptica. El rendimiento cuántico de fotoblanquecido permanente del Alexa Fluor 647 NHS ester TEA es muy bajo y puede ser parcialmente suprimido por un tampón redox anaeróbico[5]. Alexa Fluor 647 NHS ester TEA también se puede utilizar en combinación con reactivos de etiquetado como la faloidina para la tinción de líneas celulares, así como para la tinción de vesículas unilamelares gigantes (GUVs)[6-7].

References:
[1] Anderson GP, Nerurkar NL. Improved fluoroimmunoassays using the dye Alexa Fluor 647 with the RAPTOR, a fiber optic biosensor. J Immunol Methods. 2002;271(1-2):17-24.
[2] Wuethrich I, Guillen E, Ploegh HL. A mouse monoclonal antibody against Alexa Fluor 647. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 2014;33(2):109-120.
[3] Jiang H, D'Agostino GD, Cole PA, Dempsey DR. Selective protein N-terminal labeling with N-hydroxysuccinimide esters. Methods Enzymol. 2020;639:333-353.
[4] Fan S, Webb JEA, Yang Y, et al. Observing the Reversible Single Molecule Electrochemistry of Alexa Fluor 647 Dyes by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy. Angew Chem Int Ed Engl. 2019;58(41):14495-14498.
[5] Karlsson JKG, Laude A, Hall MJ, Harriman A. Photo-isomerization of the Cyanine Dye Alexa-Fluor 647 (AF-647) in the Context of dSTORM Super-Resolution Microscopy. Chemistry. 2019;25(65):14983-14998.
[6] Moghal MMR, Islam MZ, Sharmin S, Levadnyy V, Moniruzzaman M, Yamazaki M. Continuous detection of entry of cell-penetrating peptide transportan 10 into single vesicles. Chem Phys Lipids. 2018;212:120-129.
[7] Bharadwaj A, Kumar A, Mitra R, Jaganathan BG, Boruah BR. Enhanced fluorescence blinking of AF647 fluorophores in Mowiol via violet and UV light induced recovery for superior localization microscopy. Methods Appl Fluoresc. 2024;12(3):10.1088/2050-6120/ad4ae6.

Protocolo (Protocol)

Este plan solo proporciona una guía, por favor modifíquela para satisfacer sus necesidades específicas.

(1) Tinción de vesículas unilamelares gigantes (GUV) con Alexa Fluor 647 NHS ester TEA y Observation[1].

1. Disuelva Alexa Fluor 647 NHS ester TEA en solución acuosa para preparar un 6.0µM Alexa Fluor 647 NHS ester TEA.

2. La suspensión de vesículas unilamelares grandes (LUV) se mezcló con la solución Alexa Fluor 647 NHS ester TEA soluble en agua Alexa Fluor 647 NHS ester TEA y luego se incubó con películas de lípidos secas de dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG)/dioleoilfosfatidilcolina (DOPC)/biotina-lípido (relación molar 20/79/1) en tampón H (10mM HEPES, pH7,5, 100mM NaCl y 1mM EGTA) que contiene 0,10M de sacarosa a 37 °C durante 2-3 horas utilizando el método de hinchazón natural.

3. Los GUV se purificaron mediante el método de filtrado de membrana para eliminar las sondas fluorescentes y los LUV no atrapados.

4. En experimentos con transportan 10 (CF-TP10) marcado con carboxifluoresceína (CF), se observaron GUV utilizando microscopía de barrido láser confocal (CLSM) a 25±1 °C con un sistema de control de temperatura por etapa.

(2) Preparación de Alexa Fluor 647 NHS ester TEA IgG[2].

1. Alexa Fluor 647 NHS ester TEA (∼40μg) se disolvió primero con 10 μl de DMSO, luego se diluyó a un volumen final de 100 μl con agua.

2. Se añadieron diferentes volúmenes de colorantes (10, 30 o 60 μl) a 300 μg de IgG (concentración final de 2 mg/ml) en tetraborato de sodio de 50 mM, NaCl de 40 m, pH 9,0.

3. La reacción progresó durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Luego, la proteína marcada se separó del tinte no incorporado mediante cromatografía de exclusión de tamaño.

4. Se determinó la absorbancia a 280 y 650 nm para cada anticuerpo y se calcularon las relaciones D/P.

References:
[1] Moghal MMR, Islam MZ, Sharmin S, Levadnyy V, Moniruzzaman M, Yamazaki M. Continuous detection of entry of cell-penetrating peptide transportan 10 into single vesicles. Chem Phys Lipids. 2018;212:120-129.
[2] Anderson GP, Nerurkar NL. Improved fluoroimmunoassays using the dye Alexa Fluor 647 with the RAPTOR, a fiber optic biosensor. J Immunol Methods. 2002;271(1-2):17-24.

Documentos del producto (Product Documents)

Purity:>95.00%Appearance:A solid
COASDSData Sheet

Propiedades químicas (Chemical Properties)

N.º CAS
1620475-28-6
Fórmula molecular
C39H47N3O16S4
Peso molecular
942.06
Solubilidad
DMSO : 4.17 mg/mL (4.43 mM; Need ultrasonic)
Almacenamiento
-20°C, sealed storage, away from moisture and light
Consejos generales
Seleccione un disolvente adecuado según los datos de solubilidad del producto. Una vez preparada, divida la solución madre en alícuotas para evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Utilice las soluciones madre en un plazo de 6 meses si se conservan a -80°C, o de 1 mes si se conservan a -20°C.
Para mejorar la solubilidad, caliente el tubo a 37°C y soníquelo durante un periodo adecuado.
Condiciones de envío
Las muestras de evaluación se envían con acumuladores de frío. Los demás tamaños se envían a temperatura ambiente o, previa solicitud, con acumuladores de frío.

Calculadoras (Calculators)Molaridad / Dilución / Peso molecular / Conversión de unidades / Formulación in vivo / Solubilidad

g/mol

Reviews

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