Ferrozine reacciona con hierro divalente para formar una especie de complejo magenta estable y se utiliza para la determinación directa de hierro en agua con una absorbancia máxima a 562 nm [1,2]. El espectro de absorción visible del complejo ferroso de ferrozine exhibe un pico único y nítido a 562 nm. En esta longitud de onda, la absorptividad molar es 27.900 y la ley de Beer-Lambert se cumple hasta aproximadamente 4 mg/L de Fe [1].
Ensayo de Ferrozine de células ISE6[3]
El ensayo de ferrozine para medir el hierro no hemínico se adaptó para determinar la concentración de hierro en células ISE6. Después de la reducción y/o exposición al hierro, las células se recolectaron y los lisados celulares se obtuvieron utilizando el método descrito anteriormente. Se añadió HCl concentrado (99,5%) y luego se calentó a 95 °C. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se centrifugó y se obtuvo el sobrenadante, al cual se añadió 75 mM de ascorbato o agua. Posteriormente, se añadió 10 mM de ferrozine. Se añadió acetato de amonio saturado para facilitar el desarrollo del color. Se midió la absorbancia a 550 nm y se calculó la concentración de hierro basada en un coeficiente de extinción molar del complejo hierro-ferrozine de 27.900 M-1cm-1 y basada en la concentración de proteína. La concentración de proteína se midió utilizando un Kit de Ensayo de Proteínas Micro BCA. La concentración total de hierro se calculó a partir de muestras con ascorbato. La concentración de hierro ferroso se calculó a partir de muestras sin ascorbato (agente reductor), mientras que la concentración de hierro férrico se calculó a partir de la diferencia entre la concentración total de hierro y la concentración de hierro ferroso.
References:
[1]. Stookey L L. Ferrozine---a new spectrophotometric reagent for iron[J]. Analytical chemistry, 1970, 42(7): 779-781.
[2]. Jeitner T M. Optimized ferrozine-based assay for dissolved iron[J]. Analytical biochemistry, 2014, 454: 36-37.
[3]. Hernandez E P, Kusakisako K, Talactac M R, et al. Induction of intracellular ferritin expression in embryo-derived Ixodes scapularis cell line (ISE6)[J]. Scientific reports, 2018, 8(1): 1-12.