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2 publicationsPublicaciones de investigadores que utilizan este productoDescripción (Description)
Z-Arg-Arg-AMC es un sustrato específico para la histona B con un Ex/Em de 360/460nm. Z-Arg-Arg-AMC tiene propiedades de escisión dependientes del pH. A pH neutro, Z-Arg-Arg-AMC es fácilmente escindo por la histona B. Sin embargo, Z-Arg-Arg-AMC es muy poco activo a pH ácido con solo un tercio de la actividad a pH neutro[1-4].
References:
[1] Ma C, Liang K, Tang L, He S, Liu X, He M, Li Y. Identification and characteristics of a cathepsin L-like cysteine protease from Clonorchis sinensis. Parasitol Res. 2019 Mar;118(3):829-835.
[2] Yoon MC, Phan V, Podvin S, Mosier C, O'Donoghue AJ, Hook V. Distinct Cleavage Properties of Cathepsin B Compared to Cysteine Cathepsins Enable the Design and Validation of a Specific Substrate for Cathepsin B over a Broad pH Range. Biochemistry. 2023 Aug 1;62(15):2289-2300.
[3] Yoon M C, Hook V, O’Donoghue A J. Cathepsin B dipeptidyl carboxypeptidase and endopeptidase activities demonstrated across a broad pH range[J]. Biochemistry, 2022, 61(17): 1904-1914.
[4] Klemenčič M, Novinec M, Dolinar M. Orthocaspases are proteolytically active prokaryotic caspase homologues: the case of M icrocystis aeruginosa[J]. Molecular Microbiology, 2015, 98(1): 142-150.
Protocolo (Protocol)
Este esquema es de la literatura, por favor modifíquelo según sus necesidades específicas.
1. Configuración de la solución:
(1) Use DMSO anhidro para disolver Z-Arg-Arg-AMC a 100mM, y almacene en pequeñas porciones a -20℃ para evitar la congelación y descongelación repetida.
(2) Use PAB (la solución salina de equilibrio de Hank no contiene bicarbonato de sodio, contiene 0.6mM de CaCl2, 0.6mM MgCl2, de 2 mm L-cysteine, 25 mm Pipes) para diluir Z-Arg-Arg-AMC con una concentración de 5-100μM.
Nota: Ajuste la concentración del líquido de trabajo de acuerdo con la situación real.
2. Ensayo celular para la actividad de la catepsina B
(1) Extienda las células en placas de 96 pozos y crezcan hasta la confluencia del 80% (10-20,000 células por pozo).
(2) Los medios fueron aspirados y las células se lavaron con 0.1mL de NaCl/Pi de Dulbecco.
(3) Incubar las células con 0.2mL de PAB durante 30 minutos a 37°C.
(4) El tampón fue reemplazado por PAB fresco que contenía 100µM Z-Arg-Arg-AMC, y la actividad de la proteasa B del tejido celular se determinó en presencia o ausencia del 0.1% de Triton X-100 (que aumenta la actividad hidrolítica de Z-Arg-Arg-AMC).
(5) La detección se realizó utilizando un lector de microplacas Labsystems Fluoroskan II en modo cinético a 37°C utilizando un filtro de excitación de 360nm y un filtro de emisión de 460nm.
Documentos del producto (Product Documents)
Propiedades químicas (Chemical Properties)
Utilice las soluciones madre en un plazo de 6 meses si se conservan a -80°C, o de 1 mes si se conservan a -20°C.
Para mejorar la solubilidad, caliente el tubo a 37°C y soníquelo durante un periodo adecuado.
Calculadoras (Calculators)Molaridad / Dilución / Peso molecular / Conversión de unidades / Formulación in vivo / Solubilidad
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