CY5

Este plan solo proporciona una guía; por favor, modifíquelo según sus necesidades específicas.

1. Preparación de la solución

(1) Solución de trabajo: Disolver el sólido de CY5 en DMSO a una concentración final de 10 mM y filtrar para esterilizar.

Nota: La solución de trabajo debe prepararse y utilizarse de inmediato. Antes de usarla, se debe activar con una solución de condensación de 500 μg/mL (Cat. No.: GA11126) antes de realizar experimentos de etiquetado.

2. Pasos experimentales para etiquetar proteínas con CY5

(1) Preparación de la proteína: Disolver la proteína en un tampón a pH 8.5 sin aminas primarias (como Tris o glicina) y iones de amonio, preparando una concentración de 2-10 mg/mL para obtener la mejor eficiencia de etiquetado. Si el pH es inferior a 8.0, ajustar con bicarbonato de sodio al 1 M.

(2) Cálculo de la cantidad de solución de trabajo de CY5: La cantidad de CY5 (PM=656.81) necesaria para la reacción de etiquetado depende de la cantidad de proteína a etiquetar. La relación molar óptima de colorante CY a proteína es de aproximadamente 10:1.

(3) Reacción de etiquetado: Tomar el volumen calculado de solución de trabajo de CY5 y agregarlo lentamente a la solución de muestra de proteína, agitar suavemente para mezclar y luego centrifugar brevemente para recoger la muestra en el fondo del tubo de reacción. Evitar mezclas violentas para prevenir la desnaturalización e inactivación de la muestra de proteína.

(4) Reacción de incubación: Colocar el tubo de reacción en un lugar oscuro y agitar suavemente, incubando durante 60 minutos a temperatura ambiente. Cada 10-15 minutos, invertir suavemente el tubo varias veces para mezclar completamente los dos reactivos y mejorar la eficiencia de etiquetado.

Nota:

(1) Este producto es un tinte fluorescente no activado. Para etiquetar moléculas biológicas como péptidos y proteínas, debe ser activado primero con ácido carboxílico. Si se requiere una forma activada, se recomienda el sulfo-Cyanine5 NHS Ester (Cat. No.: GC59174).

(2) Este protocolo proporciona orientación para usar CY5 en experimentos de etiquetado de proteínas. Puede ajustarse según otra literatura y requisitos experimentales específicos. La operación debe llevarse a cabo en un entorno estéril para evitar que contaminantes interfieran con la reacción. Evitar el contacto directo con los reactivos de reacción.