M40

Líneas celulares

Método de preparación

Después de que las ratas neonatales de Sprague-Dawley fueron profundamente anestesiadas con halotano, se realizó una craneotomía y el antesencéfalo fue ablado en el borde caudal del puente por transección. El tornco espinal cervical se aislaron mediante disección en la solución modificada de Krebs que contenía 128.0mM de NaCl, 3.0mM de KCl, 0.5mM de NaH₂PO₄, 1.5mM de CaCl₂, 1.0mM de MgSO₄, 21mM de NaHCO₃, 1.0mM de mannitol, 30.0mM de glucosa, y 10.0mM de HEPES.

El estómago, conectado al esófago con los nervios vagos que lo unen al tronco cerebral, se mantuvo, y se eliminaron todos los demás órganos internos. Luego, la preparación se aisló y se fijó, con la superficie dorsal hacia arriba, en una capa de resina Sylgard en una cámara de grrabación. Se hizo una incisión en la superficie lateral de la pared del estómago para minimizar el posible daño en la fibra vaga gástrica. El estómago se abrió y se sujetó el estómago, y tanto la mucosa como la serosa se expusieron a la solución de Krebs en el compartimento gástrico. La preparación se sobrefundió con la solución de Krebs a 23±1℃. La solución de baño se aireó continuamente con una mezcla de 95% de O₂ y 5% de CO₂ y se ajustó a un pH de 7.35 a 7.45.

Las descargas unitarias tónicas individuales se registraron extracelularmente en el subnúcleo medial del NTS mediante microelectrodos de vidrio llenos de NaCl 3M, con una impedancia de 10 a 20 MΩ . Se aplicó una prueba de colisión para identificar las entradas ortodrómicas para garantizar que solo las neuronas NTS de segundo o orden superior en el sistema aferente vagal gástrico. Las concentraciones de galanina y M40 utilizadas en el experimento son de 100nM. Cada compuesto de prueba se disolvió primero en un pequeño volumen de la solución de Krebs. Luego se aplicó la solución concentrada al compartimento gástrico. La concentración final deñ fármaco en el compartimento gástrico se calculó en función de la cantidad de solución concentrada y el volumen total de Krebs en el compartimento gástrico. La solución farmacológica se aplicó 5 minutos antes de cualquier observación farmacológica para proporcionar tiempo suficiente para que la administración del medicamento alcanzara un nivel de estado estacionario. Después de cada observación, la droga fue lavada del compartimento. Las respuestas neuronales NTS observadas durante el ensayo previo o previo al tratamiento (control) se compararon con las posteriores al ensayo (lavado) para confirmar que la actividad neuronal del tronco encefálico regresó al nivel de control después del lavado.

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Modelos animales

Ratas Sprague-Dawley sin patógenos específicos machos

Método de preparación

Los animales fueron anestesiados con uretano (1.1g/kg) a e inmediatatamente traqueotomizados. La arteria femoral fue canulada con un catéter de plástico que contenía heparina (50IU/ml, 0.9% de NaCl w/v) para registar la presión arterial y la frecuencia cardíaca. y el animal se colocó en un marco estereotáxico. La cabeza se flexionó a 45°, los músculos del cuello se diseccionaron con un cuchillo eléctrico para evitar el sangrado y se expuso la memebrana tlanto-occipital. El procedimiento quirúrgico tomó de 8 a 10 minutos y se permitió que los animales se estabilizaran durante al menos 30 minutos. Durante todo el experimento, la temperatura corporal se mantuvo en 37.5±0.5℃ por medio de una manta termostática.

Para estudiar si M40 solo ejerce algún efecto en los 11 parámetros cardiovasculares centrales, grupos deratas : recibieron inyecciones intracisternales de M40 en dosis de 1.0nmol.

Forma de dosificación

Áreas de aplicación

References:
[1] YUAN C S, DEY L, XIE J T, et al. Gastric effects of galanin and its interaction with leptin on brainstem neuronal activity [J]. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics, 2002, 301(2): 488-93.
[2] NARVáEZ J A, DíAZ-CABIALE Z, HEDLUND P B, et al. The galanin receptor antagonist M40 blocks the central cardiovascular actions of the galanin N-terminal fragment (1-15) [J]. Eur J Pharmacol, 2000, 399(2-3): 197-203.