PMSF

PMSF es un inhibidor irreversible de la serina proteasa que a menudo se agrega al tampón de lisis antes de la lisis celular o tisular para prevenir la degradación de las proteínas^[1,2]. PMSF puede inhibir eficazmente la quimotripsina, la trisina, la trombina, etc. El principio de acción de PMSF es que puede reconocer y sulfonar específicamente el sitio activo del residuo de serina que determina la actividad enzimática. PMSF itambién es un inhibidor de la amida hidrolasa de ácido graso (FAAH), las proteasas de cisteína (como la papaína, cuya actividad inhibitoria es invertida por DTT), y aceticolinesterasa de origen mamífero^[3]. El efecto inhibidor de PMSF revertirse mediante DTT (Dithiothreitol).

La desactivación de PMSF aumenta con el aumento del pH y la temperatura. Las vidas medias de los inhibidores son aproximadamente 110, 55, y 35 minutos a 25°C y pH 7.0, 7.5, y 8.0, respectivamente. A pH 8, 100μM PMSF se inactiva casi completamente en 1 hora a 25°C o 22 horas a 4°C. Las soluciones de stock de PMSF preparadas con alcohol isoproplíco al 100% son estables durante meses o más a 25°C. En 1 semana a 25°C y pH 7.0, la quimotripsina inhibida por PMSF no se reactivó^[4].

En experimentos con animales, PMSF tuvo efectos analgésicos significativos a dosis de 120 y 300 mg/kg. Las dosis subanalgesicas (60 mg/kg, i.p.) de PMSF pueden reducir la tolerancia resultante de la administración aguda y crónica de opioides^[3].

PMSF se puede usar solo o a menudo mezclado con otros inhibidores sw la proteasa como la aprotinia A o inhibidores de la fosfatasa como el oortovanadato de sodio.

PMSF es poco soluble en agua y tiene poca estabilidad en soluciones acuosas. Se recomienda añadrilo al búfer de lisis u otras soluciones acuosas antes de su uso. El polvo de PMSF se puede disolvr en metanol, etanol o alcohol isopropílico para preparar una solución de almacenamiento. La concentración recomendada es de 100-200mM. La concentración de trabajo efectiva de PMSF es de 0.1-1mM.