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RBITC,o isotiocianato de Rodamina B,es un colorante fluorescente conocido por su grupo isotiocianato que puede unirse covalentemente a aminas primarias en proteínas y biomoléculas[1][2]. RBITC tiene una longitud de onda máxima de excitación de 562 nm y una longitud de onda de emisión de 582 nm[3]. RBITC se utiliza principalmente en biología celular[4],biología molecualr e inmunología para la localización de proteínas[5], el seguimiento celular[6],y el estudio de procesos celulares[7].
References:
[1]. Weiss HR. Measurement of cerebral capillary perfusion with a fluorescent label. Microvasc Res. 1988 Sep;36(2):172-80. doi: 10.1016/0026-2862(88)90017-9. PMID: 3141746.
[2]. Yang T, Sun D, Xu P, et al. Stability of bovine serum albumin labelled by rhodamine B isothiocyanate[J]. Biomed. Res, 2017, 28(9): 3851-3854.
[3]. Poon CK, Tang O, Chen XM, et al. Fluorescent Labeling and Biodistribution of Latex Nanoparticles Formed by Surfactant-Free RAFT Emulsion Polymerization. Macromol Biosci. 2017 Oct;17(10). doi: 10.1002/mabi.201600366. Epub 2016 Dec 14. PMID: 27973756.
[4]. Butcher EC, Weissman IL. Direct fluorescent labeling of cells with fluorescein or rhodamine isothiocyanate. I. Technical aspects. J Immunol Methods. 1980;37(2):97-108. doi: 10.1016/0022-1759(80)90195-7. PMID: 7003013.
[5]. Nigen M, Croguennec T, Madec MN, et al. Apo alpha-lactalbumin and lysozyme are colocalized in their subsequently formed spherical supramolecular assembly. FEBS J. 2007 Dec;274(23):6085-93. doi: 10.1111/j.1742-4658.2007.06130.x. Epub 2007 Oct 26. PMID: 17970750.
[6]. Luo Y, Cai X, Li H, et al. Hyaluronic Acid-Modified Multifunctional Q-Graphene for Targeted Killing of Drug-Resistant Lung Cancer Cells. ACS Appl Mater Interfaces. 2016 Feb 17;8(6):4048-55. doi: 10.1021/acsami.5b11471. Epub 2016 Feb 3. PMID: 26785717.
[7]. Shi H, He X, Wang K, et al. Rhodamine B isothiocyanate doped silica-coated fluorescent nanoparticles (RBITC-DSFNPs)-based bioprobes conjugated to Annexin V for apoptosis detection and imaging. Nanomedicine. 2007 Dec;3(4):266-72. doi: 10.1016/j.nano.2007.08.004. Epub 2007 Nov 7. PMID: 17988954.
Protocolo (Protocol)
Protoclo experimental para el marcaje de proteínas con RBITC:
1.Preparación de la solución RBITX: Disolver RBITC a 10mg/mL en DMSO antes de su uso.Homogeneizar.
2.Preparación de la solución proteica: Disolver la proteína objetivo en fosfato de sodio 0,1M,0,15M tampón NaCI a pH 7,2 para fomar una solución proteica d e1 mg/mL.
3.Reacción de marcado:Transfiere la solución de RBITC a la solución proteica en una proporción molar de 5:1 y remueve suavemente la mazcla en la pscuridad a 4ºC durante 12 horas.
4. Diálisis:Eliminar RBITC no reaccionado mediante diálisis o con una columna de eliminación de tintes.
5.Tras la diálisis,recoger la solución proteica marcada,determinar su concentración y almancenar la prote´´ina marcada con RBITC a 4ºC protegida de la luz hasta que esté lista para su uso.
Este protocolo solo proporciona una guía y debe modificarse según tus necesidades específicas.
[1]. Yang T, Sun D, Xu P, et al. Stability of bovine serum albumin labelled by rhodamine B isothiocyanate[J]. Biomed. Res, 2017, 28(9): 3851-3854.
Documentos del producto (Product Documents)
Propiedades químicas (Chemical Properties)
Utilice las soluciones madre en un plazo de 6 meses si se conservan a -80°C, o de 1 mes si se conservan a -20°C.
Para mejorar la solubilidad, caliente el tubo a 37°C y soníquelo durante un periodo adecuado.
Calculadoras (Calculators)Molaridad / Dilución / Peso molecular / Conversión de unidades / Formulación in vivo / Solubilidad
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