Theaflavine-3,3'-digallate

Método de preparación

Las mezclas de enzima Na+/K+-ATPase, Tris-buffer (que contine 1mM de ouabaína o no) y diferentes concentraciones de Theaflavine-3,3’-digallate se preincubaron a 37°C como el método del ensayo de actividad de Na+/K+-ATPase. Se añadieron concentraciones crecientes del sustrato ATP en el rango de 2.0–5.0mM para estimar la cinética ATP de Na+/K+-ATPase. Después de la incubación durante 60 minutos a 37°C, se añadieron 200µL de ácido trichloroacetic para terminar la reacción, y el fósforo inorgánico liberado se determinó mediante un kit de ensayo de fosfato. Las constantes Vmax y Km se determinaron utilizando gráficos Lineweaver–Burk generados a partir de las ecuaciones relevantes de Michaelis–Menten. La cinética de Na+/K+-ATPase para los cofactores Na+ or K+ se determinó mediiante el mismo método en presencia de concentraciones crecientes de NaCl o KCl en el rango de 1.0–8.0mM o 0.5–4.0mM. La cantidad de ATP fue constante (5mM).

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Líneas celulares

Método de preparación

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Modelos animales

Método de preparación

Se establecieron modelos de xenoinjerto tumoral NCI-N87/luc en ratones desnudos atímicos. Los tumores fueron fotografiados por un sistema de imágenes in vivo. Para evaluar la eliminación de SHCBP1 involucarda en la sensibilidad del cáncer gástrico al trastuzumab, las ratones desnudos BALB/c (6–8 semanas de edad) recibieron una sola inyección de flanco subcutáneo de 1 × 10⁶ Lenti-vector o Lenti-shRNA dirigido a células NCI-N87/luc en una suspensión PBS:Matrigel 1:1. Cuando los volúmenes tumorales alcanzaron los 100mm³, se administró trastuzumab a 10mg/kg por vía intraperitoneal dos veces por semana. Los tumores se midieron con calibrador tres veces por semana. Los animales fueron sacrificados y se realizó tinción inmunohisstoquímica en los tumores después del tratamiento farmacológico durante 21 días. Para determinar los efectos sinérgicos de combinar trastuzumab con Theaflavine-3,3'-digallate, las células NCI-N87/luc (1 × 10⁶ células por sitio) en suspensión se mezclaron con volúmenes iguales de Matrigel y se inyectaron por vía subcutánea en ratones desnudos BALB/c hembra de 6–8 semanas de edad. Cuando los volúmenes tumorales alcanzaron los 100mm³, los xenoinjertos tumorales NCI-N87 preestablecidos se trataron con vehículo, trastuzumab (intraperitoneal, 10mg/kg, 2×/wk × 3), Theaflavine-3,3'-digallate (subcutáneo, 2.5mg/kg o intraperitoneal, 50mg/kg, 1×/día × 21), o una combinación de los agentes. Al final de los experimentos, los animales fueron sacrificados y los tumores subcutáneos fueron cosechados. La proliferación tumoral se evaluó mediante tinción inmunohistoquímica Ki-67.

Forma de dosificación

Áreas de aplicación

References:
[1] Qu F, Liu S, He C, et al. Comparison of the effects of green and black tea extracts on Na+/K+?ATPase activity in intestine of type 1 and type 2 diabetic mice[J]. Molecular nutrition & food research, 2019, 63(17): 1801039.
[2] Ding Y, Chen B, Gao Z, Suo H, Xiao H. Pre-treated theaflavin-3,3'-digallate has a higher inhibitory effect on the HCT116 cell line. Food Nutr Res. 2017 Nov 15;61(1):1400340.
[3] Shi W, Zhang G, Ma Z, et al. Hyperactivation of HER2-SHCBP1-PLK1 axis promotes tumor cell mitosis and impairs trastuzumab sensitivity to gastric cancer[J]. Nature Communications, 2021, 12(1): 2812.