FLAG tag Peptide
Catalog No.: GP10150Purity:>98.00%Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH
FLAG tag Peptide ist ein 8-Peptid (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys), das eine intestinale Kinase-Beschränkungsstelle enthält.
Die Produkte sind ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt. Nicht zur Anwendung am Menschen. Wir verkaufen nicht an Patienten.
Cas No.: 98849-88-8
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Tel: (909) 407-4943 / (909) 689-7124Email: sales@glpbio.com
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2 publicationsPublikationen von Forschern, die dieses Produkt verwendenBeschreibung (Description)
FLAG tag Peptide ist ein 8-Peptid (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys), das eine intestinale Kinase-Beschränkungsstelle enthält. Das FLAG Tag Peptid-Fusionssystem wird in der Immunaffinitätschromatographie zur Proteinidentifikation und -reinigung verwendet. FLAG tag Peptide-Markierungspeptide ermöglichen die Elution unter nicht-denaturierenden Bedingungen[1,6]. Das FLAG tag Peptide kann entweder an das N- oder C-Terminus eines gegebenen Fusionsproteins fusioniert werden.
Das FLAG tag Peptide-Markierungspeptid-Fusionssystem umfasst eine einzigartige und weit verbreitete Technik zur Proteinidentifikation und -reinigung. Wenn es kovalent an einen festen Träger gebunden ist, kann der Anti-Flag M1 Antikörper für die schnelle Reinigung von FLAG tag Peptide-Fusionsproteinen in einem milden, calciumabhängigen Affinitätschromatographie-Verfahren verwendet werden. FLAG tag Peptide-Fusionsproteine werden typischerweise in einem einzigen Schritt zur Homogenität gereinigt, ausgehend von einem rohen Zellhomogenat oder Überstand, ohne dass das Protein jemals anderen Bedingungen als physiologischer Kochsalzlösung bei pH 7.2 (mit Calcium oder EDTA) ausgesetzt wird. Der gesamte Reinigungsprozess kann innerhalb weniger Stunden durchgeführt werden[2-3].
Das N-terminale FLAG tag Peptide-Fusionsprotein kann durch Agarose-Affinitätsgel gereinigt werden[5]. Ein verkürztes Proteinreinigungsverfahren, bei dem mechanische Zellzerstörung und Affinitätsreinigung durch Immobilisierung des Anti-Flag M1 Antikörpers auf magnetischen Glasperlen kombiniert werden. Die modifizierten Glasperlen wurden zu Hefezellen hinzugefügt und auf einem Labormischgerät gemischt. Die magnetischen Glasperlen fangen das Zielprotein ein, während die Hefezellen zerstört werden. Durch den Kontakt mit einem stationären Magneten können die magnetischen Glasperlen sehr effizient von Hefezelltrümmern getrennt werden. Chelatbildner wie EDTA waren in der Lage, die FLAG tag Peptide-Fusionsproteine von den magnetischen Glasperlen zu eluieren[4].
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
Protokoll (Protocol)
Reinigung von Ribonnukleoprotein(RNP)-Komplexen aus spezifischer zellulärer RNA durch FLAG-Peptide-gekoppeltes Antisense-Oligonukleotid(ASO)-Pulldown[1]: | |
Vorbereitungsmethode | Herstellung des FLAG tag Peptide konjugierten Antisense-Oligonukleotids 1.50 μL 20 μM(1,000 pmol/50 μL) eiskaltes Oligonukleotid mit 50 μL frisch zubereiteter kalter 1 M NaIO4-Lösung mischen. 2.10 Minuten auf Eis inkubieren. 3.1 mL eiskaltes 2% LiClO4/Aceton zugeben und vortexen. 4.10 Minuten auf Eis inkubieren. 5.Das Röhrchen 10 Minuten bei 20,000 g und 4℃ zentrifugieren. 6.Den überstand vorsichtig absaugen und 1 ml kaltes Aceton zugeben. 7.Das Röhrchen 5 Minuten bei 20,000 g und 4℃ zentrifugieren. 8.Die FLAG-Hydrazid-Lösung während der Zentrifugation vorbereiten. 9.Überstand absaugen. 10.Das präzipitierte Oligonucleotid in 12 μL 0.1 M Natriumacetat (pH 5.2) lösen. 11.12 μL 30 mM FLAG-Peptide-Hydrazid-Lösung zugeben. 12.Das Röhrchen 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 13.10 μL 1 M NaCNBH3 zugeben. 14.Das Röhrchen 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 15.60 μL Reinstwasser und 10 μL 3 M Natriumacetat(pH 5.2) zugeben und vortexen. 16.250 μL 100% Ethanol zugeben und vortexen. 17.Das Röhrchen 30 Minuten bei -80℃ inkubieren. 18.Das Röhrchen 10 Minuten bei 15,000 g zentrifugieren. 19.Den Überstand vorsichtig absaugen und 1 mL 80%igen Ethanol hinzufügen. 20.Das Röhrchen 5 Minuten bei 15,000 g zentrifugieren. 21.Den Überstand vorsichtig absaugen. Den Waschschritt wirderholen. 22.Das Oligonucleotidpellet in 50 μL Wasser lösen. 23.Die Konzentration des FLAG-peptide-konjugierten Oligonucleotids durch Messung der Absorption bei 260 nm und Vergleich mit der Absorption der ursprünglichen Oligonucleotidlösung bestimmen. |
References: | |
Produktdokumente (Product Documents)
Purity:>98.00%Appearance:A solid
Chemische Eigenschaften (Chemical Properties)
CAS-Nr.
98849-88-8
Synonyme
H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH
Chemischer Name
FLAG Peptide
SMILES
C1=CC(=CC=C1CC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)N)O
Summenformel
C41H60N10O20
Molekulargewicht
1012.97
Löslichkeit
≥50.6 mg/mL in DMSO, ≥210.6 mg/mL in Water, ≥34.03 mg/mL in EtOH
Lagerung
Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen
Allgemeine Hinweise
Wählen Sie anhand der Löslichkeitsdaten des Produkts ein geeignetes Lösungsmittel. Aliquotieren Sie die Stammlösung nach der Herstellung, um wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.
Verwenden Sie Stammlösungen bei Lagerung bei -80°C innerhalb von 6 Monaten bzw. bei -20°C innerhalb von 1 Monat.
Zur Verbesserung der Löslichkeit das Röhrchen auf 37°C erwärmen und für eine angemessene Dauer beschallen.
Verwenden Sie Stammlösungen bei Lagerung bei -80°C innerhalb von 6 Monaten bzw. bei -20°C innerhalb von 1 Monat.
Zur Verbesserung der Löslichkeit das Röhrchen auf 37°C erwärmen und für eine angemessene Dauer beschallen.
Versandbedingungen
Evaluierungsmuster werden mit Kühlakkus versandt. Andere verfügbare Größen werden bei Raumtemperatur oder auf Anfrage mit Kühlakkus versandt.
Rechner (Calculators)Molarität / Verdünnung / Molekulargewicht / Einheitenumrechnung / In-vivo-Formulierung / Löslichkeit
g/mol
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