IF 16
PMID: 39846120 ↗Hoechst 33342
Catalog No.: GC63515Purity:>98.00%
Der Nukleinsäurefarbstoff Hoechst 33342(Ex/Em: 350/461 nm) wird oft als zellgängiger Kerngegenfarbstoff verwendet, der nach Bindung an doppelsträngige DNA(dsDNA) blau fluoresziert.
Die Produkte sind ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt. Nicht zur Anwendung am Menschen. Wir verkaufen nicht an Patienten.
Cas No.: 23491-52-3
25mgIn Stock
$45.00
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50 mgIn Stock
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100 mgIn Stock
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Tel: (909) 407-4943 / (909) 689-7124Email: sales@glpbio.com
Zitate (Citations)
6 publicationsPublikationen von Forschern, die dieses Produkt verwendenBeschreibung (Description)
Der Nukleinsäurefarbstoff Hoechst 33342(Ex/Em: 350/461 nm) wird oft als zellgängiger Kerngegenfarbstoff verwendet, der nach Bindung an doppelsträngige DNA(dsDNA) blau fluoresziert. Hoechst 33342 wird oft in verschiedenen Studien zur Zellzählung, Zellzyklusanalyse und Zellreplikation verwendet. Es eignet sich besonders zur Identifizierung kondensierter Zellkerne in apoptotischen Zellen sowie in Kombination mit BrdU-Färbung für Zellzyklusstudien.
Hoechst-Farbstoffe sind auch zur Überwachung der Zellviabilität durch die Überwachung von Veränderungen in ihren Emissionsspektren nützlich. Als DNA-Farbstoffe, die an die kleine Furche binden und AT-selektiv sind, können Hoechst-Farbstoffe an alle Nukleinsäuren binden, zeigen aber eine stärkere Fluoreszenzverstärkung bei AT-reichen doppelsträngigen DNA-Strängen im Vergleich zu GC-reichen Strängen[1]. Die Eigenschaft wurde genutzt, um Q-Bänder in Chromosomen zu identifizieren. Dabei handelt es sich um Regionen, die reich an AT-Basenpaaren sind und bei Anfärbung mit dem Farbstoff Chinacrin hell fluoreszieren[2].
Abbildung: Fluoreszenzanregungs- und -emissionsspektren von an DNA gebundenem Hoechst 33342
Referenzen:
[1]. Portugal J, Waring MJ. Assignment of DNA binding sites for 4′, 6-diamidine-2-phenylindole and bisbenzimide (Hoechst 33258). A comparative footprinting study. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Gene Structure and Expression. 1988 Feb 28;949(2):158-68.
[2]. Weisblum B, Haenssler E. Fluorometric properties of the bibenzimidazole derivative Hoechst 33258, a fluorescent probe specific for AT concentration in chromosomal DNA. Chromosoma. 1974 Sep;46(3):255-60.
Protokoll (Protocol)
Der Plan dient nur als Richtlinie. Bitte passen Sie ihn an Ihre spezifischen Bedürfnisse an.
1. Hoechst-33342-Färbelösung herstellen
(1) Hoechst-33342-Stammlösung herstellen: Festes Hoechst 33342 in DMSO lösen und eine Stammlösung mit einer Konzentration von 10 mg/mL herstellen.
Hinweis: Es wird empfohlen, die Hoechst-Stammlösung in Aliquots aufzuteilen und lichtgeschützt bei -4°C oder -20°C zu lagern, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden.
(2) Arbeitslösung herstellen: Die Stammlösung mit vorgewärmtem serumfreien Medium oder Puffer(z.B. HBSS oder PBS) verdünnen und eine Hoechst-33342-Arbeitslösung mit einer Konzentration von 10 μg/mL herstellen.
Hinweis: Die Konzentration der Hoechst-Arbeitslösung gegebenfalls anpassen und diese umgehend zubereiten.
2. Zellfärbung
2.1 Suspensionszellen(am Beispiel einer 6-Well-Platte)
(1) Die suspendierten Zellen 3-5 Minuten bei 1000 g zentrifugieren. Den Überstand verwerfen und die Zellen zweimal je 5 Minuten mit PBS waschen.
(2) 1 mL Hoechst-33342-Arbeitslösung zugeben und 5-10 Minuten im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubieren.
(3) Nach der Inkubation 5 Minuten bei 1000 g zentrifugieren, den Überstand entfernen, PBS zugeben und 2-3 Mal je 5 Minuten waschen.
(4) Die Zellen in serumfreiem Zellkulturmedium oder PBS resuspendieren und mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie untersuchen.
2.2 Adhärente Zellen
(1) Adhärente Zellen auf sterilen Deckgläschen kultivieren.
(2) Nehmen Sie das Deckglas aus dem Kulturmedium, saugen Sie überschüssiges Kulturmedium ab und legen Sie das Deckglas in eine feuchte Umgebung.
(3) Geben Sie 100uL Hoechst-33342-Arbeitslösung von einer Ecke des Deckglases hinzu, schütteln Sie es vorsichtig, um alle Zellen gleichmäßig mit dem Farbstoff zu bedecken, und inkubieren Sie es 5-15 Minuten lang im Dunkeln bei Raumtemperatur.
(4) Saugen Sie die Arbeitslösung ab, waschen Sie das Deckglas 2-3 Mal mit Kulturmedium und beobachten Sie es mit einem Fluoreszenzmikroskop.
3. Mikroskopische Detektion: Die Anregungs-/Emissionswellenlänge von Hoechst 33342 ist 350/461 nm.
Vorsichtsmaßnahmen:
① Bei der Färbung fixierter Zellen oder Gewebeproben muss das Fixiermittel nach der Fixierung durch Spülen entfernt werden.
② Die Färbung mit Hoechst 33342 erfolgt üblicherweise nach anderen Färbungen. Ist keine weitere Färbung erforderlich, kann die Färbung mit Hoechst 33342 direkt durchgeführt werden.
③ Um die Fluoreszenzlöschung zu verlangsamen, wird die Verwendung eines Anti-Fluoreszenzlöschungs-Eindeckmittels empfohlen.
④ Fluoreszenzfarbstoffe neigen zur Löschung. Vermeiden Sie daher Lichteinwirkung.
⑤ Hoechst 33342 ist hautreizend. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
Referenzen:
[1]. Lisa C Crowley, Brooke J Marfell , Nigel J Waterhouse. Analyzing Cell Death by Nuclear Staining with Hoechst 33342. 2016 Sep 1;2016(9). doi: 10.1101/pdb.prot087205.
Produktdokumente (Product Documents)
Purity:>98.00%Appearance:A solid
Biologische Daten (Biological Data)
1 / 2
Chemische Eigenschaften (Chemical Properties)
CAS-Nr.
23491-52-3
Summenformel
C27H28N6O
Molekulargewicht
452.55
Löslichkeit
DMSO : 10 mg/mL (22.10 mM; Need ultrasonic)|Water : 1 mg/mL (2.21 mM; ultrasonic and warming and heat to 80°C)
Lagerung
4°C, protect from light
Allgemeine Hinweise
Wählen Sie anhand der Löslichkeitsdaten des Produkts ein geeignetes Lösungsmittel. Aliquotieren Sie die Stammlösung nach der Herstellung, um wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.
Verwenden Sie Stammlösungen bei Lagerung bei -80°C innerhalb von 6 Monaten bzw. bei -20°C innerhalb von 1 Monat.
Zur Verbesserung der Löslichkeit das Röhrchen auf 37°C erwärmen und für eine angemessene Dauer beschallen.
Verwenden Sie Stammlösungen bei Lagerung bei -80°C innerhalb von 6 Monaten bzw. bei -20°C innerhalb von 1 Monat.
Zur Verbesserung der Löslichkeit das Röhrchen auf 37°C erwärmen und für eine angemessene Dauer beschallen.
Versandbedingungen
Evaluierungsmuster werden mit Kühlakkus versandt. Andere verfügbare Größen werden bei Raumtemperatur oder auf Anfrage mit Kühlakkus versandt.
Rechner (Calculators)Molarität / Verdünnung / Molekulargewicht / Einheitenumrechnung / In-vivo-Formulierung / Löslichkeit
g/mol
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