Polyethylenimine linear (MW:10000)

Dieser Plan dient nur als Richtlinie. Bitte passen Sie ihn an Ihre spezifischen Bedürfnisse an.
1. Lösungsvorbereitung
(1) Lagerlösung herstellen: Kryokonserviertes Feststoff auf Raumtemperatur bringen, Polyethylenimine linear in sterilem Wasser lösen und eine Lagerlösung mit einer Konzentration von 1 mg/mL herstellen.
Hinweis: Nicht verwendete Lagerlösung aliquotieren und lichtgeschützt bei -20°C oder -80°C lagern, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden.
(2) Arbeitslösung herstellen: Vor dem eigentlichen Experiment die Lagerlösung mit sterilem Wasser(oder serumfreiem Medium) auf die gewünschte Arbeitskonzentration verdünnen, z.B. 250 μg/mL.
 Hinweis: Die optimale Arbeitskonzentration kann je nach Bedarf angepasst oder anhand der Literatur ermittelt werden. Die Arbeitslösung muss sofort zubereitet und verwendet werden.
2. Schritte zur transienten Transfektion von 293T-Zellen mit Polyethylenimine linear^[1](aus der Literatur, nur als Referenz)
(1) Zellaussaat: Einen Tag vor der Transfektion wurden 293T-Zellen in der exponentiellen Wachstumsphase in eine Kulturschale mit 6 cm Durchmesser ausgesät. Es ist darauf zu achten, dass die Zellen eine Konfluenz von 50-70% erreichen.
(2 Kulturmedium wechseln: Das Zellkulturmedium entfernen und durch serumfreies Kulturmedium ersetzen.
(3) DNA-PEI-Komplex herstellen: 240 μL DNA-Lösung(32 μg/mL) vorbereiten. 180 µL sterile PEI-Lösung(250 µg/mL) hinzufügen. Kurz vortexen, um zu mischen, und 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
(4) DNA-PEI-Komplex zugeben: Den Komplex tropfenweise zu den Zellen geben und 6 Stunden in einem 5% CO₂-Inkubator inkubieren.
(5) Kulturmedium wechseln: Nach 6 Stunden das Kulturmedium mit dem DNA-PEI-Komplex durch DMEM-Kulturmedium mit fötalem Kälberserum(FBS) ersetzen.
(6) Kultivierung und Genexpression: Weitere 48 Stunden in einem CO₂-Inkubator kultivieren und dann die Genexpression analysieren.
Hinweis: Dieses experimentelle Protokoll dient nur als Referenz für die Verwendung von Polyethylenimine linear in Zelltransfektionsexperimenten. Bitte passen Sie die einzelnen Schritte den experimentellen Erfordernissen an. Führen Sie bitte notwendige Kontrollexperimente durch, einschließlich unbehandelter Zellen und Zellen, die mit bekannten, wirksamen Transfektionsreagenzien transfiziert wurden, um die Transfektionseffizienz und Zytotoxizität zu bewerten.

References:
[1] Wang W , Zheng Q , Yu C ,et al.WSV056 Inhibits Shrimp Nitric Oxide Synthase Activity by Downregulating[J].Frontiers in microbiology, 2021, 12:796049.