Proteinase K

Proteinase K ist eine breitbandige Serinprotease und unser Produkt wird aus Pichia pastoris-Zellen mit einem geklonten Gen, das für die endolytische Protease von Engyodontium album (Tritirachium album) kodiert, extrahiert. Es handelt sich um eine hochreaktive Protease, die häufig zur Verdauung verschiedener Proteine und Enzyme (einschließlich Endonuklease, Exonuklease, DNase oder RNase) verwendet wird. Daher wird sie in der Regel bei DNA-Präparationen eingesetzt, ohne die Integrität der isolierten DNA zu beeinträchtigen. Sie hat eine hervorragende Leistung unter einer breiten Palette von Bedingungen: pH-Wert, Puffer, Detergenzien (wie SDS), Chelatbildner (wie EDTA) und Temperatur. Proteinase K hydrolysiert Peptidbindungen bevorzugt neben der Carboxylgruppe hydrophober Aminosäuren (aliphatisch, aromatisch und andere).

"Abgesehen von der Isolierung des Genoms kann es auch bei der Lokalisierung von Enzymen oder der Entfernung von Enzymen aus DNA zur Verbesserung der Klon-Effizienz eingesetzt werden."

Die geeignete Arbeitskonzentration von Proteinase K liegt immer im Bereich von 0,05 bis 1 mg/mL. Die Aktivität des Enzyms kann durch Zugabe von 0,2 bis 1% SDS oder 1 bis 4 mol Harnstoff stimuliert werden. Es wird durch Calcium (1-5 mM) aktiviert, obwohl Calciumionen die Enzymaktivität nicht beeinflussen, sondern zur thermischen Stabilität beitragen und das Proteinase vor Autolyse schützen. Proteinase K hat zwei Bindungsstellen für Ca²⁺, die sich in der Nähe des aktiven Zentrums befinden, aber nicht direkt am katalytischen Mechanismus beteiligt sind. Daher hat das Calciumion eine regulatorische Funktion für die Substratbindungsstelle von Proteinase K. Das Enzym wird durch DIFP oder PMSF inaktiviert. Es wird jedoch nicht gehemmt durch EDTA, Iodoessigsäure, trypsinspezifischer Inhibitor TLCK, chymotrypsinspezifischer Inhibitor TPCK und p-Chloromercuribenzoat.

Wir empfehlen einen optimalen pH-Wert von 7,5 bis 8,0 und eine optimale Temperatur zwischen 50 und 55°C. Bei Temperaturen über 65°C tritt eine schnelle Denaturierung auf. Sie können es für eine Hitzeinaktivierung bei einer Temperatur unterhalb von 95°C für 10 Minuten halten.

References:

[1]. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
[2]. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium albumlimber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.