FLAG tag Peptide

Le FLAG tag Peptide est un peptide de 8 acides aminés (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys) contenant un site de restriction de la kinase intestinale. Le système de fusion des peptides FLAG tag est utilisé en chromatographie d'immunoaffinité pour l'identification et la purification des protéines. Les peptides étiquetés par FLAG tag permettent une élution dans des conditions non dénaturantes[1,6]. Le peptide FLAG tag peut être fusionné à l'extrémité N- ou C-terminale d'une protéine de fusion donnée.

Le système de fusion des peptides étiquetés FLAG tag constitue une technique unique et largement utile pour l'identification et la purification des protéines. Lorsqu'il est fixé de manière covalente à un support solide, l'anticorps anti-Flag M1 peut être utilisé pour la purification rapide des protéines de fusion FLAG tag Peptide par une procédure de chromatographie d'affinité douce, dépendante du calcium. Les protéines de fusion FLAG tag Peptide sont généralement purifiées jusqu'à l'homogénéité en une seule étape, à partir d'un homogénat ou surnageant cellulaire brut, sans jamais exposer la protéine à des conditions autres que du sérum physiologique à pH 7,2 (avec du calcium ou de l'EDTA). Le processus de purification complet peut être effectué en quelques heures[2-3].

La protéine de fusion FLAG tag Peptide N-terminale peut être purifiée par gel d'affinité à l'agarose[5]. Une procédure de purification des protéines simplifiée combine la désintégration mécanique des cellules et la purification par affinité via l'immobilisation de l'anticorps anti-Flag M1 sur des billes de verre magnétiques. Les billes de verre modifiées sont ajoutées aux cellules de levure et mélangées à l'aide d'un mélangeur vortex de laboratoire. Les billes de verre magnétiques capturent la protéine cible tandis que les cellules de levure sont détruites. En contactant un aimant stationnaire, les billes de verre magnétiques peuvent être séparées très efficacement des débris cellulaires de levure. Les agents chélatants, tels que l'EDTA, peuvent éluer les protéines de fusion FLAG tag Peptide des billes de verre magnétiques[4].

References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.