FLAG tag Peptide (Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH) |
| Catalog No.GP10150 |
Le FLAG tag Peptide est un peptide de 8 acides aminés (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys) contenant un site de restriction de la kinase intestinale.
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Cas No.: 98849-88-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Le FLAG tag Peptide est un peptide de 8 acides aminés (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys) contenant un site de restriction de la kinase intestinale. Le système de fusion des peptides FLAG tag est utilisé en chromatographie d'immunoaffinité pour l'identification et la purification des protéines. Les peptides étiquetés par FLAG tag permettent une élution dans des conditions non dénaturantes[1,6]. Le peptide FLAG tag peut être fusionné à l'extrémité N- ou C-terminale d'une protéine de fusion donnée.
Le système de fusion des peptides étiquetés FLAG tag constitue une technique unique et largement utile pour l'identification et la purification des protéines. Lorsqu'il est fixé de manière covalente à un support solide, l'anticorps anti-Flag M1 peut être utilisé pour la purification rapide des protéines de fusion FLAG tag Peptide par une procédure de chromatographie d'affinité douce, dépendante du calcium. Les protéines de fusion FLAG tag Peptide sont généralement purifiées jusqu'à l'homogénéité en une seule étape, à partir d'un homogénat ou surnageant cellulaire brut, sans jamais exposer la protéine à des conditions autres que du sérum physiologique à pH 7,2 (avec du calcium ou de l'EDTA). Le processus de purification complet peut être effectué en quelques heures[2-3].
La protéine de fusion FLAG tag Peptide N-terminale peut être purifiée par gel d'affinité à l'agarose[5]. Une procédure de purification des protéines simplifiée combine la désintégration mécanique des cellules et la purification par affinité via l'immobilisation de l'anticorps anti-Flag M1 sur des billes de verre magnétiques. Les billes de verre modifiées sont ajoutées aux cellules de levure et mélangées à l'aide d'un mélangeur vortex de laboratoire. Les billes de verre magnétiques capturent la protéine cible tandis que les cellules de levure sont détruites. En contactant un aimant stationnaire, les billes de verre magnétiques peuvent être séparées très efficacement des débris cellulaires de levure. Les agents chélatants, tels que l'EDTA, peuvent éluer les protéines de fusion FLAG tag Peptide des billes de verre magnétiques[4].
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
| Purification des complexes ribonucléoprotéiques (RNP) composés d'ARN cellulaire spécifique par pull-down d'oligonucléotide antisens couplé au peptide FLAG [1] : | |
Méthode de préparation | Préparation de l'oligonucléotide antisens conjugué au peptide FLAG 1. Mélanger 50 μL d'oligonucléotide froid à 20 μM (1 000 pmol/50 μL) avec 50 μL de NaIO4 froid fraîchement préparé à 1 M. 2. Incuber sur glace pendant 10 minutes. 3. Ajouter 1 mL de LiClO4/acéton à 2 % froid et vortexer. 4. Incuber sur glace pendant 10 minutes. 5. Centrifuger le tube à 20 000 g à 4 °C pendant 10 minutes. 6. Aspirer soigneusement le surnageant pour l'éliminer et ajouter 1 mL d'acétone froide. 7. Centrifuger le tube à 20 000 g à 4 °C pendant 5 minutes. 8. Pendant la centrifugation, préparer la solution FLAG-hydrazide. 9. Aspirer le surnageant pour l'éliminer. 10. Dissoudre l'oligonucléotide précipité dans 12 μL d'acétate de sodium à 0,1 M (pH 5,2). 11. Ajouter 12 μL de solution FLAG-peptide-hydrazide à 30 mM. 12. Incuber le tube à température ambiante pendant 30 minutes. 13. Ajouter 10 μL de NaCNBH3 à 1 M. 14. Incuber le tube à température ambiante pendant 30 minutes. 15. Ajouter 60 μL d'eau ultrapure et 10 μL d'acétate de sodium à 3 M (pH 5,2), puis vortexer. 16. Ajouter 250 μL d'éthanol à 100 % et vortexer. 17. Incuber le tube à -80 °C pendant 30 minutes. 18. Centrifuger le tube à 15 000 g pendant 10 minutes. 19. Aspirer soigneusement le surnageant pour l'éliminer et ajouter 1 mL d'éthanol à 80 %. 20. Centrifuger le tube à 15 000 g pendant 5 minutes. 21. Aspirer soigneusement le surnageant pour l'éliminer. Répéter l'étape de lavage. 22. Dissoudre le pellet d'oligonucléotide dans 50 μL d'eau. 23. Estimer la concentration de l'oligonucléotide conjugué au peptide FLAG en mesurant l'absorbance à 260 nm et en la comparant avec l'absorbance de la solution d'oligonucléotide d'origine. |
Références : [1]. Adachi S, Natsume T. Purification de l'ARN non codant et des protéines liées en utilisant des oligonucléotides antisens conjugués au peptide FLAG. Methods Mol Biol. 2015;1262:265-74. doi: 10.1007/978-1-4939-2253-6_16. PMID: 25555587. | |
| Cas No. | 98849-88-8 | SDF | |
| Synonymes | H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH | ||
| Chemical Name | FLAG Peptide | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=CC=C1CC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)N)O | ||
| Formula | C41H60N10O20 | M.Wt | 1012.97 |
| Solubility | ≥50.6 mg/mL in DMSO, ≥210.6 mg/mL in Water, ≥34.03 mg/mL in EtOH | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.9872 mL | 4.936 mL | 9.872 mL |
| 5 mM | 0.1974 mL | 0.9872 mL | 1.9744 mL |
| 10 mM | 0.0987 mL | 0.4936 mL | 0.9872 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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