PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium)

Dosage de l'activité phosphatase du sol^{[1, 2, 3]}

Ce protocole fournit uniquement une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.

1 Préparation de solutions

① Tampon universel modifié (MUB): Tris(hydroxyméthyl)aminométhane 3.025g; Acide Malique 2.90g; Acide citrique 3.50g; Acide Borique 1.57g; Hydroxide de sodium 1N (solution d'hydroxide de sodium à une normalité de 1) 122ml; Eau - compléter à un volume 250ml.

②Solution de PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium) , 0.115mol/L: Dissoudre 1.927g de PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium) dans MUB et diluer la solution à 50ml avec MUB. Conserver la solution au réfrigérateur.

③ Chlorure de calcium, 0.5mol/L: Dissoudre 73.5g de CaCl₂·2H₂O dans de l'eau et diluer la solution à 1L.

④ Hydroxide de sodium, 0.5mol/L: Dissoudre 20g de NaOH dans de l'eau et diluer la solution à 1L.

⑤ Solution standard de p-nitrophenol (pNP) : Dissoudre 1.00g de p-nitrophénol dans de l'eau et diluer la solution à 1L. Conserver la solution au réfrigérateur.

2. Tamiser les échantillons de sol frais collectés à la fin de l'été à 5mm.

3. Mélanger 1 g de sol avec 0.2ml de toluène, 4ml de Tampon Universel Modifié (MUB) (pH 6.5 pour le dosage d' ACP, pH 11 pour le dosage d'ALP) et 1ml de PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium).

4. Placer le mélange dans un tube à centrifuger scellé et incuber à 37°C pendant 1h.

5. Après l'incubation, ajouter 1 ml de chlorure de calcium (CaCl₂) 0.5mol/L et 4ml d'hydroxide de sodium (NaOH) 0.5mol/L, et mélanger soigneusement.

6. Filtrer la suspension de sol sur du papier filtre qualitatif et mesurer la couleur jaune du p-nitrophenol (pNP) libéré par l'enzyme à une longueur d'onde de 405 nm à l'aide d'un sepctrophotomètre par colorimétrie.

7. Déduire la concentration réelle de pNP dans l'extrait de sol en se référant à une courbe d'étalonnage tracée simultanément (établissant la relation entre l'absorbance et des solutions de concentration croissante en pNP standard).

8. Convertir la concentration réelle de pNP dans les échantillons en taux d'activité enzymatique, exprimés en mg de pNP par kg de sol sec par heure.

References:
[1] Tabatabai M A, Bremner J M. Use of p-nitrophenyl phosphate for assay of soil phosphatase activity[J]. Soil Biology & Biochemistry, 1969, 1(4):301-307.
[2] P. Campdelacreu Rocabruna, X. Domene, A. Matteazzi, et al. Effect of organic fertilisation on soil phosphatase activity, phosphorus availability and forage yield in mountain permanent meadows. Agriculture, Ecosystems & Environment, 368 (2024) 109006.
[3] Skujins J J, Braal L, Mclaren A D. Characterization of phosphatase in a terrestrial soil sterilized with an electron beam[J]. 1962.
 ADDIN EN.REFLIST