SynaptoRedTM C2

Ce plan n'est qu'un guide, veuillez le modifier pour qu'il réponde à vos besoins spécifiques.

1. Préparation de la solution

(1) Solution mère : Préparer la solution mère de SynaptoRedTM C2 avec du DMSO ou de l'EtOH à une concentration de 1-5mM.

Note : Après avoir aliquoté la solution stock inutilisée, la conserver à -20°C ou -80°C à l'abri de la lumière pour éviter les congélations et décongélations répétées.

(2) Solution de travail : Diluer la solution mère avec un tampon approprié (tel qu'un milieu de culture sans sérum, HBSS ou PBS) pour préparer la solution de travail SynaptoRedTM C2 avec une concentration de 5-20μM.

Remarque : la solution de travail doit être préparée et utilisée immédiatement. La concentration finale de la solution de travail doit être optimisée en fonction des différentes lignées cellulaires et des systèmes expérimentaux. Il est recommandé de commencer par la concentration recommandée et d'explorer la concentration optimale dans une fourchette de 10 fois.

2. Coloration des cellules en suspension

(1) Les cellules en suspension sont centrifugées à 4°C et 1000rpm pendant 3-5min et le surnageant est éliminé. Laver deux fois avec du PBS pendant 5 minutes à chaque fois.

(2) Ajouter 1mL de solution de travail SynaptoRedTM C2 et incuber à température ambiante dans l'obscurité pendant 5-30min. Le temps de culture optimal varie selon les cellules.

(3) Après incubation, centrifuger à 1000-1500rpm pendant 5 minutes, éliminer le surnageant et laver 2-3 fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.

(4) Remettre les cellules en suspension dans du milieu de culture cellulaire sans sérum préchauffé ou du PBS. Observer par microscopie à fluorescence ou cytométrie de flux.

3. Coloration des cellules adhérentes

(1) Cultiver des cellules adhérentes sur des lamelles stériles.

(2) Retirer la lamelle couvre-objet du milieu de culture, aspirer l'excès de milieu de culture et placer la lamelle couvre-objet dans un environnement humide.

(3) Ajouter 100μL de solution de travail SynaptoRedTM C2 à partir d'un coin de la lamelle et agiter doucement pour couvrir uniformément toutes les cellules avec le colorant.

(4) Incuber à température ambiante dans l'obscurité pendant 5 à 30 minutes. Le temps de culture optimal varie selon les cellules.

(5) Aspirer la solution de travail du colorant et laver la lamelle 2 ou 3 fois avec du milieu de culture. Observer au microscope à fluorescence.

Remarque : tous les colorants fluorescents présentent des problèmes d'extinction. Essayez d'éviter la lumière pour ralentir l'extinction de la fluorescence. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables lors de l'utilisation.