CCVJ

CCVJ法によるα-D-1,4-グルカンの重合度の測定

このプロトコールは、研究データから作成され、参考までである。

特定の実験需要に基づき、調整が必要な場合もある。

（1）試薬とサンプルの調製：ジメチルスルホキシド（DMSO）でCCVJを溶解し、1mmol/Lの原液を調製し、光を避けて保存する。使用する前に、リン酸ナトリウム緩衝液（5mM、pH=7.0）を使い、作業濃度（例えば19µM）に希釈する。一連の異なる重合度（DP）で、直鎖状α-D-1,4-グルカンモデル分子（MM）の一連の溶液または分散液を調製する。濃度の範囲は1-5g/Lであり、分子量は0.18kDaから70.00kDaをカバーする（DP1からDP450に対応）。

（2）サンプルのインキュベートと遠心分離：1.0-5.0mgのMMサンプルを1.5mLの遠心分離管に置く。990µLのリン酸ナトリウム緩衝液と10µLのCCVJ原液を添加して、CCVJの最終濃度を19μMにする。ボルテックスして徹底的に混ぜて、100℃で1時間インキュベートする。室温に冷却した後、8000gで15分間遠心分離する。上清を採取し、使用する前に、光から避けて1時間静置する。

（3）蛍光スペクトル測定：150µLの上清をマイクロ石英キュベットに移す。蛍光分光光度計を使い、420nmの励起波長、450-600nmの発光波長の蛍光分光光度計でCCVJ蛍光スペクトルをスキャンする（または、約491nmで特異的にモニタリングする）。スリット幅を10nmに、温度を25℃に設定する。最大の発光波長（約491-494nm）で、蛍光強度を記録する。

注意事項：

（1）CCVJは光に対して敏感的である。全ての操作は、光から避けて行うべきである。インキュベートと測定の間の温度とpH条件は厳密に管理するべきである。

（2）安全と健康のために、操作中には白衣と使い捨ての手袋をご装着して下さい。

References:
[1] Huang M, Guo S, Li Z, et al. Molecular rotor as an in-situ fluorescent probe for the degree of polymerization of α-D-1,4-glucans. Carbohydr Polym. 2024 Jan 15;324:121573.