引用文献 (Citations)
6 publications本製品を使用した研究者による文献製品説明 (Description)
Coelenterazineは天然で、細胞透過性の海洋性ルシフェリンである。Coelenterazineは複数のルシフェラーゼまたは光タンパク質の基質である。Coelenterazineは、カルシウムイオンと活性酸素種検出のプローブである(Ex/Em=429/466nm)。Coelenterazineは、レポーター遺伝子アッセイ、体内生物発光イメージング、Ca²⁺の検出、BRETと酸化ストレス関連の研究に使える[1-4]。
実験プロトコル (Protocol)
Coelenterazineの使用プロトコール[1-3]
このプロトコールはガイドのみを提供する。具体的なニーズに合わせてご調整願います。
染色溶液の調製:
(1)メタノールにCoelenterazineを溶解し、4.7mMの原液を調製する。注:未使用の原液を分注し、遮光して、-20°Cまたは-80°Cで保存する。繰り返された冷凍融解の循環を避けるべきである。
(2)原液を0.1Mのリン酸カリウム緩衝液で希釈し、0.4μMから2.5μMの作業溶液を調製する。注:実際の条件に応じて作業濃度を調整する。使用する直前に新鮮に調製するべきである。
ミトコンドリア活性酸素種の検出(ラット心臓ミトコンドリアを例にして):
(1)ラットの心臓ミトコンドリアまたは亜ミトコンドリア粒子(SMP)を単離する。タンパク質の濃度を約5mg/mlに調整する。
(2)1mgのミトコンドリアまたはSMP懸濁液を2.5μM Coelenterazineと2mg/ml NADHに添加する。15秒以内の積光シグナルを速やかに測定する。
細胞染色:
(1)Renillaルシフェラーゼを発現する細胞を培養する。細胞を無色溶液で単回洗浄する。
(2)0.4μM Coelenterazineを添加する。速やかに遮光して37℃で6時間インキュベートする。
(3)生物発光イメージングシステムで画像を取得する。
体内マウスイメージング:
(1)Renillaルシフェラーゼを安定的に発現する異種移植腫瘍を持つマウスに、2mg/kg Coelenterazineを尾静脈注射した。
(2)体内でCoelenterazineを約5分間循環させる。生物発光イメージングシステムを使い、同所性腫瘍と転移巣の画像を撮る。殺処分の後、主要臓器をホモジナイズする。50μL Coelenterazine基質と10μLの組織ライセートを混ぜる。ルミノメーターで定量する。
注意事項:
(1)動物実験は、動物福祉のガイドラインに従わなければならない。
(2)ご自分の安全と健康の為に、実験中は白衣と使い捨ての手袋をご着用願います。
製品資料 (Product Documents)
生物学的データ (Biological Data)
化学的性質 (Chemical Properties)
計算ツール (Calculators)モル濃度 / 希釈 / 分子量 / 単位変換 / in vivo製剤 / 溶解度
Reviews
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