DAF-2

DAF-2は細胞と組織に使われる一酸化窒素（NO）の蛍光検出器であり、励起と発光波長はそれぞれ495と517nmである。酸素化溶液で、反応性窒素種はNO自動酸化ニトロソ酸DAF-2から生成し、高蛍光性のDAF-2トリアゾールを生成する^[1]。NOを検出するDAF-2の能力を、培地の中の二価カチオン濃度（特にカルシウム）と入射光に強く影響される^[2]。DAF-2が完全に励起されたら、蛍光強度は30分間以上非常に安定するが、カテコールアミン、アスコルビン酸のような還元剤の存在は、抗酸化作用を通じて、NO誘発のDAF-2蛍光を軽減する^[3]。

体外で、DAF-2 (5µM)は、37℃で45分間培養した後、ヒトEA.hy 926内皮細胞からの4-bromo-A23187刺激のNOを確実に定量化した。蛍光の増加は、HPLC-FLDで速やかに検出した^[4]。33℃で、1mM DAF-2は、若年の成体ラットから分離された中脳または海馬の冠状切片を30分間培養した。450-490nmの照射で、外側被蓋核、背側縫線核、背外側中脳水道周囲灰白質、深丘層、皮質領域のニューロンに点状の蛍光が観察された^[5]。

References:
[1] Jourd'heuil D. Increased nitric oxide-dependent nitrosylation of 4,5-diaminofluorescein by oxidants: implications for the measurement of intracellular nitric oxide. Free Radic Biol Med. 2002 Sep 1;33(5):676-84.
[2] Broillet M, Randin O, Chatton J. Photoactivation and calcium sensitivity of the fluorescent NO indicator 4,5-diaminofluorescein (DAF-2): implications for cellular NO imaging. FEBS Lett. 2001 Mar 2;491(3):227-32.
[3] Nagata N, Momose K, Ishida Y. Inhibitory effects of catecholamines and anti-oxidants on the fluorescence reaction of 4,5-diaminofluorescein, DAF-2, a novel indicator of nitric oxide.J Biochem. 1999 Apr;125(4):658-61.
[4] Uhlenhut K, Högger P. Pitfalls and limitations in using 4,5-diaminofluorescein for evaluating the influence of polyphenols on nitric oxide release from endothelial cells. Free Radic Biol Med. 2012 Jun;52(11-12):2266-75.
[5] Brown L A, Key B J, Lovick T A. Bio-imaging of nitric oxide-producing neurones in slices of rat brain using 4,5-diaminofluorescein. J Neurosci Methods. 1999 Oct 15;92(1-2):101-10.