Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP

Sortase A活性アッセイ^[1-2]

このプランは文献から作成されたものであり、ご自分の具体的なニーズに合わせてご調整願います。

1.基質作業溶液の調製

（1）原液の調製：DMSOにBacterial Sortase Substrate III, Abz/DNPを溶解し、濃度は10mMである。

注：繰り返された凍結と融解を避けるために、未使用の原液を分注し、暗所、-20°Cまたは-80°Cで保存するべきである。

（2）作業溶液の調製：反応緩衝液（50mM Tris-HCl、150mM NaCl；pH=7.5）で原液を希釈する。

注：作業溶液を新鮮に調製し、4℃、氷の上で短く保存する。

2.96ウェルのプレートの用意：

実験ウェル：Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP基質とSortase Aの混合物、濃度はそれぞれ10μMと5-15μMである。

サンプルブランクウェル：Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP基質のみ、濃度は10μMであり、反応緩衝液を添加して体積を調整する。

基質ブランクウェル：Sortase Aのみ、濃度は5-15μMであり、反応緩衝液を添加して体積を調整する。

3.37℃、96ウェルのプレートで10-60分間インキュベートし、マイクロプレートリーダーを使い、420nmの励起波長で、320nmにおける蛍光強度を測定する。

注意事項：

1）蛍光基質には全て消光の問題が存在する。蛍光の消光を遅らせるために、光からできる限り避けて下さい。

2）ご自分の安全と健康の為に、白衣と使い捨ての手袋をご着用願います。

References:
[1] Gaspar AH, Marraffini LA, Glass EM, Debord KL, Ton-That H, Schneewind O. Bacillus anthracis sortase A (SrtA) anchors LPXTG motif-containing surface proteins to the cell wall envelope. J Bacteriol. 2005;187(13):4646-4655.
[2] Chen Y, Li W, Wang L, Wang B, Suo J. Novel inhibition of Staphylococcus aureus sortase A by plantamajoside: implications for controlling multidrug-resistant infections. Appl Environ Microbiol. 2025;91(1):e0180424.