引用文献 (Citations)
1 publications本製品を使用した研究者による文献製品説明 (Description)
Palmitic Acid Alkyneは、ω末端アルキンを持つパルミチン酸であり、その化学試薬は、アジド基を含有する分子とアルキル鎖に基づくPROTACリンカーとして作用する[1]。Palmitic acid alkyneはタンパク質の検出、共役輸送結合、画像補助ベクターとPROTACリンカーに応用される[2,3,4,5]。
References:
[1] Honcharenko, Dmytro et al. “New Alkyne and Amine Linkers for Versatile Multiple Conjugation of Oligonucleotides.” *ACS omega* vol. 6,1 579-593. 18 Dec. 2020, doi:10.1021/acsomega.0c05075
[2] Yap, Megan C et al. “Rapid and selective detection of fatty acylated proteins using omega-alkynyl-fatty acids and click chemistry.” *Journal of lipid research* vol. 51,6 (2010): 1566-80. doi:10.1194/jlr.D002790
[3] García-Cazorla, Yolanda et al. “Conjugation inhibitors compete with palmitic acid for binding to the conjugative traffic ATPase TrwD, providing a mechanism to inhibit bacterial conjugation.” *The Journal of biological chemistry* vol. 293,43 (2018): 16923-16930. doi:10.1074/jbc.RA118.004716
[4] Paiva, Eduardo M, and Florian M Schmidt. “Ultrafast Widefield Mid-Infrared Photothermal Heterodyne Imaging.” *Analytical chemistry* vol. 94,41 (2022): 14242-14250. doi:10.1021/acs.analchem.2c02548
[5] Gao, Xinxin, and Rami N Hannoush. “A Decade of Click Chemistry in Protein Palmitoylation: Impact on Discovery and New Biology.” *Cell chemical biology*vol. 25,3 (2018): 236-246. doi:10.1016/j.chembiol.2017.12.002
実験プロトコル (Protocol)
パルミチン酸化アッセイ
1.HEK293T細胞を播種し、10%のFBSを添加されたDMEMの中のプラスミド(YKT6-WT BioID、YKT6-3E BioIDとWnt3A)で細胞を遺伝子導入する。
2.エタノールで、ω-Alkynylパルミチン酸(Palmitic Acid Alkyne)を溶解し、最終濃度を50mMにし、-80℃で保存した。
3.Palmitic acid alkyneを、5%のFBS(脂肪酸なし)を添加されたDMEMで、最終濃度が100μMになるまで希釈し、室温、水浴で15分間超音波処理し、更に15分間事前複合させた。
4.パルミチン酸アルキン含有の培地を添加し、24時間後部分的に交換した。
5.遺伝子導入の72時間後、細胞を溶解(1% Triton x-100, 0.1% SDS, PICのPBS)し、4℃で、16000gで5分間遠心分離する。
6.Wessel-Fluggeタンパク質沈殿法で溶解物を沈殿させる。
7.クリック標識反応物[0.1mM biotin-azide, 1mM Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride]を水に溶解させる。
8.暗い環境で、37℃で2時間振盪することで、水の中で、DMSOに溶解された0.1mM Tris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amineと1mM CuSO4と培養する。
9.クリック反応の後、-80℃で10Xメタノールでサンプルを一晩中沈殿させ、その後は遠心分離し、氷冷メタノールで再び洗浄する。
10.4% SDSで乾燥したペレットを再懸濁する。
11.High Capacity Neutravidin Agarose Resinでクリックビオチン化タンパク質を沈殿する。
12.サンプルを1% SDSで洗浄し溶出し、更に免疫ブロットで分析した。
*このプロトコールはあくまでもガイドラインであり、ご自分のニーズに合わせてご調整ください。
References:
1.Linnemannstöns, Karen et al. “Ykt6-dependent endosomal recycling is required for Wnt secretion in the Drosophila wing epithelium.” Development (Cambridge, England) vol. 147,15 dev185421. 14 Aug. 2020, doi:10.1242/dev.185421
製品資料 (Product Documents)
化学的性質 (Chemical Properties)
ストック溶液は、-80°Cで保存する場合は6か月以内、-20°Cで保存する場合は1か月以内に使用してください。
溶解性を高めるには、チューブを37°Cに温め、適切な時間超音波処理してください。
計算ツール (Calculators)モル濃度 / 希釈 / 分子量 / 単位変換 / in vivo製剤 / 溶解度
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