Recombinant Human Fibronectin ,rFN

このプロトコルは、細胞培養コーティング実験を例として使用し、参照のみを目的としている。実際のアプリケーション条件では、特定の実験的ニーズに基づいて最適化が必要になる場合がある[1]。

1　ソリューション準備：

受領時に、組換えヒトフィブロネクチンを滅菌1×PBSに溶解して、1mg/mlの濃度でストック溶液を調製する。ストックソリューションを一連の使用ボリュームにアリコートし、–20°Cの条件で保管して、繰り返しの凍結融解サイクルを避ける。使用する前に、必要なアリコートを解凍し、滅菌1×PBS（pH 7.2-7.4）で希釈して、作業のソリューションを準備する。作業濃度は50〜100μg/mLでおすすめである。

2　プレートコーティング（例：6ウェルプレート）

6ウェルプレートの各井戸に約800μlの組換えヒトフィブロネクチン、RFN作業溶液を加え、底面全体が均等に覆われるようにする。次の条件のいずれかでプレートをインキュベートする：4°Cで一晩、または37°Cで1時間で。

3　作業ソリューションの回復

インキュベーションの後、残りの組換えヒトフィブロネクチン、RFN作業ソリューションを収集し、–20℃に保存する。不妊が維持されれば、1週間以内に他の培養容器をコーティングするために再利用できる。

4　細胞播種

コーティングした後に必要に応じて残留溶液を取り外します。完全な細胞培養培地の適切な量を追加し、細胞播種を直接進める。組換えヒトフィブロネクチン、RFNは細胞の接着を促進し、細胞の拡散と移動を促進し、最適な細胞の成長をサポートする。

注：

1.Recombinant Human Fibronectin ,rFN作業ソリューションがすぐに使用されない場合、–20の密閉容器に保存できる。最適なパフォーマンスを確保するために、1週間以内に使用することをお勧めする。2.使用されている培養プレートまたはフラスコのサイズと表面積に従って、Recombinant Human Fibronectin ,rFN作業ソリューションの量を調整する。3.組換えタンパク質、組換えヒトフィブロネクチンとして、RFNは穏やかに処理する必要がある。溶解中に激しい揺れを避け、凍結融解サイクルを繰り返する。4.実験室の安全性については、ハンドリング中に適切な個人用保護具や使い捨て手袋などの適切な個人用保護具を着用してください。

References:
[1]. Rappa G, Kunke D, Holter J, et al. Efficient expansion and gene transduction of mouse neural stem/progenitor cells on recombinant fibronectin[J]. Neuroscience, 2004, 124(4): 823-830.