Ferrozine은 이분 아이언과 반응하여 안정된 망고 컬러 컴플렉스 종을 형성하며, 최대 흡수도가 562nm인 물에서 철을 직접 측정에 사용된다.Ferrozine의 발광복합체의 가시 광학 흡수 스펙트럼은 562nm에서 급격한 피크를 보이다. 이 파장에서의 몰 흡수율은 27,900이며, Beer-Lambert 법칙은 약 4mg/L의 Fe 농도까지 준수된다.
ISE6 세포에 대한 Ferrozine 분석
Ferrozine 분석법은 ISE6 세포의 비혈색소 철분 농도를 측정하기 위해 적용되었다. nockdown 및/또는 철 노출 후, 세포를 수집하고 위에서 설명한 방법을 사용하여 세포 라이세이트를 수집했다. 농축된 HCl(99.5%)를 추가한 후 95°C에서 가열했다. 실내 온도에서 냉각한 후, 혼합물을 센트리퓨그하고 상청을 얻다, 그리고 75 mM ascorbate 또는 물을 추가한다. 그 다음에, 10 mM Ferrozine을 추가했다. 색상 발달을 촉진하기 위해 포화된 아몬늄 에세테이트를 추가했다.550nm에서 흡광도를 측정하고, 철-페로자인 복합체의 몰 소멸 계수 27,900 M-1cm-1과 단백질 농도를 기반으로 철 농도를 계산했다. 단백질 농도는 Micro BCA protein Assay Kit를 사용하여 측정핬다. 총 철 농도는 ascorbate가 포함된 샘플에서 계산된다. ascorbate (환원제)가 없는 샘플에서 페로스 철 농도를 계산하고, 총 철과 페로스 철 농도의 차이에서 페로스 철 농도를 계산한다.
References:
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