Ghrelin (rat)

세포주

준비 방법

C6 세포는 10% 열 비활성화 태아 소 혈청(FBS), 100U/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 F12 배양지에서 37°C, 가습 5% CO₂ 배양기에서 유지 배양하였습니다. U251 세포는 동일한 첨가제가 함유된 DMEM 배양지에서 동일한 조건 하에서 배양하였습니다. 세포를 지정된 농도의 Ghrelin으로 5분에서 24시간 처리해서 후속 분석을 수행하였습니다.

반응 조건

적용

Ghrelin은 30nM까지의 농도에서 세포 생존율에 영향을 미치지 않으면서 C6와 U251 교종 세포 모두의 이동을 용량 의존적으로 증가시켰습니다. Ghrelin은 GHS-R 단백질과 mRNA 발현을 상향 조절하였고 그 촉이동 효과는 GHS-R 길항제 D-Lys3-GHRP-6 또는 GHS-R1 siRNA에 의해 소멸되었습니다. Ghrelin은 CaMKII(Thr286 인산화)와 AMPK(Thr172/Ser485 인산화)를 활성화하였고 CaMKII 또는 AMPK의 억제는 Ghrelin 유도 이동을 억제하였습니다. Ghrelin은 추가로 IKKα/β 인산화, IκBα 인산화, p65 Ser536 인산화를 유발하고 p65/p50 핵 축적을 촉진해서 NF-κB-DNA 결합 활성과 κB 전사 활성을 증가시켜 교종 세포 이동을 유도하였고 NF-κB 활성화는 CaMKII/AMPK 신호 전달 경로의 하류에 위치하였습니다.

동물 모델

8~10주령 수컷 C57BL/6J 야생형(WT) 쥐, 8주령 그렐린-널 쥐, 8주령된 성장호르몬 분비자 수용체(GHSR)-널 쥐

준비 방법

파클리탁셀 유도 말초 신경병증 모델을 수립하기 위해 쥐를 5일 연속 매일 1회 파클리탁셀 (2mg/kg)을 복강 내 투여하였습니다(누적 용량 10mg/kg). 동시에 야생형 쥐에 Ghrelin (0.2ml PBS에 300nmol/kg) 또는 용매 PBS를 5일 연속 매일 1회 복강 내 주사하였다. Ghrelin 결핍 및 GHSR 결핍 쥐는 5일 연속 파클리탁셀(2mg/kg)과 PBS를 투여받았다. 행동 시험은 투여 전 1일과 7일에 수행하였고 모든 쥐는 7일에 안락사시킨 후 후속 조직학 분석, 산화 및 질산화 스트레스 검출 및 정량 실시간 PCR을 수행하였습니다.

제형

300nmol/kg; i.p.; 매일 한번 5일 연속

적용

야생형 쥐에서 Ghrelin은 파클리탁셀 유도 기계적 및 열 과민 반응을 완화하고 큰 수초성 좌골 신경 섬유에 영향을 미치지 않으면서 작은 무수초 표피 내 신경 섬유의 손실을 부분적으로 방지하였습니다. Ghrelin은 혈장 8-이소프로스탄, 말론디알데히드 및 산화질소 수준을 감소시키고 등쪽 뿌리 신경절에서 Ucp2, Pgc-1α 및 Sod2의 mRNA 발현을 상향 조절하였습니다. Ghrelin 결핍 및 GHSR 결핍 쥐 모두 야생형 쥐보다 더 심각한 파클리탁셀 유도 신경 손상을 보였고 Ghrelin이 파클리탁셀 유도 말초 신경병증에 대한 신경 보호 효과가 내인성 Ghrelin/GHSR 신호 전달 경로에 의해 매개됨을 확인하였습니다.